سابقه و هدف: اکینوکوکوس گرانولوزوس (Echinococcus granulosus) سستود انگلی بوده که باعث ایجاد بیماری کیست هیداتید در انسان می شود. ژن کد کننده پروتئین EG۹۵ می تواند به عنوان یک هدف مناسب جهت ساخت واکسن DNA برای پیشگیری از این بیماری باشد. با توجه به اهمیت این ژن و عدم وجود گزارشی مبنی بر مطالعه بر روی این ژن در ایران، هدف از این مطالعه شناسایی و کلون کردن ژن کد کننده پروتئین EG۹۵ ایزوله ایرانی اکینوکوکوس گرانولوزوس می باشد.

مواد و روش ها: در مرحله اول با جداسازی پروتواسکولکس از مایع کیست هیداتید، RNA را از پروتواسکولکس استخراج کرده و پس از انجام RT-PCR، نمونه‌های cDNA تکثیر شده بر روی ژل الکتروفورز بررسی شد. در مرحله بعد ژن حاصل در وکتور کلونینگ pTZ۵۷R/T کلون گردیده و جهت تایید، از دو روش Clony-PCR و هضم آنزیمی به وسیله آنزیم های محدود کننده استفاده شد. در نهایت ژن EG۹۵ کلون شده در وکتور pTZ۵۷R/T مورد تعیین توالی قرار گرفت.

نتایج: بررسی نتایج واکنش RT-PCR بر روی ژل الکتروفورز و همچنین تعیین توالی ژن کد کننده پروتئین EG۹۵ نشان دادکه این ژن دارای ۴۹۲ جفت باز بوده و با ژن EG۹۵ سویه استاندارد گزارش شده از نیوزلند و استرالیا (X۹۰۹۲۸,۱) متفاوت است. علاوه بر این با استفاده از هضم آنزیمی کلون شدن ژن EG۹۵ در پلاسمید pTZ۵۷R/T مورد تایید قرار گرفت.

نتیجه گیری: ژن EG۹۵ به طور موفقیت آمیز در پلاسمید pTZ۵۷R/T کلون شد و این پلاسمید می تواند برای مطالعات بعدی در جهت ساخت واکسن DNA مورد استفاده قرار گیرد.