[صفحه اصلی ]   [Archive] [ English ]  
:: صفحه اصلي :: درباره نشريه :: آخرين شماره :: تمام شماره‌ها :: جستجو :: ثبت نام :: ارسال مقاله :: تماس با ما ::
:: دوره 20، شماره 1 - ( دوماه نامه 1395 ) ::
جلد 20 شماره 1 صفحات 73-80 برگشت به فهرست نسخه ها
بررسی بیان پروتئین gp40/15 کریپتوسپوریدیوم پارووم در E. coli
حسین ثباتی ، حبیب جسور قره باغ، حسین هنری
استادیار مرکز تحقیقات بهداشت و تغذیه، دانشگاه علوم پزشکی بقیه اله (عج) ، sobatih@gmail.com
چکیده:   (1586 مشاهده)

سابقه و هدف: کریپتوسپوریدیوم یک انگل تک­ یاخته ­ای دارای اهمیت در پزشکی و دامپزشکی است که سبب اسهال و استفراغ در طیف وسیعی از مهره داران می­ شود. برخی از آنتی­ژن­ های سطحی انگل از جمله gp40/15 در اتصال و تهاجم به سلول میزبان و تحریک سیستم ایمنی نقش مهمی بر عهده دارند. با کلون و بیان نمودن این آنتی­ژن­ ها امکان دسترسی به پروتئین ­های نوترکیب انگل فراهم می­ شود. هدف این مطالعه بیان ژن gp40/15 کریپتوسپوریدیوم پارووم در باکتری اشرشیاکلی است.

مواد و روش ­ها: توالی ژن gp40/15 کریپتوسپوریدیوم پارووم از بانک ژن به­ شماره AF155624 استخراج و به ­صورت صناعی در PET28a+ کلون و تهیه گردید. جهت تایید از روش ­های ColonyPCR و هضم آنزیمی به ­وسیله آنزیم ­های محدودکننده BamHI وXhoI  استفاده شد. پلاسمید نوترکیب به داخل باکتری اشرشیاکلی منتقل شده و بیان پروتئین با استفاده از SDS-PAGE، وسترن بلات و الایزا با استفاده از سرم حاوی آنتی­ بادی بر ضد انگل کریپتوسپوریدیوم پارووم تایید شد و سپس با ستون کروماتوگرافی تخلیص گردید.

نتایج: نتایج نشان داد که ژن gp40/15 درپلاسمید PET28a+ کلون شده است و نتایج ColonyPCR و هضم آنزیمی پلاسمید PET28a+ حاوی ژن gp40/15، قطعه 921bp را نشان داد. بیان pEgp40/15 در باکتری اشرشیاکلی با استفاده از روش ­های SDS-PAGE، وسترن بلات والایزا تایید شد و باندی در حدود 43 کیلودالتون را نشان داد.

نتیجه ­گیری: ژن gp40/15 کلون شده در پلاسمید بیانیPET28a+ به­طور موفقیت آمیزی در باکتری اشرشیا کلی بیان شده و پروتئین نوترکیب gp40/15 در آن تولید شده است. لذا، می ­توان از این پروتئین در مطالعات بعدی جهت ساخت واکسن ­های پروتئینی نوترکیب و طراحی کیت تشخیصی استفاده نمود.

واژه‌های کلیدی: کریپتوسپوریدیوم پارووم، ژن gp40/15، بیان پروتئین، اشرشیاکلی
متن کامل [PDF 262 kb]   (474 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشي | موضوع مقاله: medicine, paraclinic
دریافت: ۱۳۹۵/۱/۲۵ | پذیرش: ۱۳۹۵/۱/۲۵ | انتشار: ۱۳۹۵/۱/۲۵
فهرست منابع
1. Wang C, Luo J, Amer S, Guo Y, Hu Y, Lu Y, et al. Multivalent DNA vaccine induces protective immune responses and enhanced resistance against Cryptosporidium parvum infection. Vaccine 2011; 29(2): 323–8.
2. Petry F, Jakobi V, Tessema TS. Host immune response to Cryptosporidium parvum infection. Exp Parasitol 2010; 126(3): 304-9.
3. Singh I, Theodos C, Tzipori S. Recombinant proteins of Cryptosporidium parvum induce proliferation of mesenteric lymph node cells in infected mice. Infect Immun 2005; 73(8): 5245-8.
4. Bouzid M, Hunter PR, Chalmers RM, Tyler KM. Cryptosporidium Pathogenicity and Virulence. Clin Microbiol Rev 2013; 26(1): 115-34.
5. Boulter-Bitzer JI1, Lee H, Trevors JT. Molecular targets for detection and immunotherapy in Cryptosporidium parvum. Biotechnol Adv 2007; 25(1): 13-44.
6. Ehigiator HN, Romagnoli P, Priest JW, Secor WE, Mead JR. Induction of murine immune responses by DNA encoding a 23-kDa antigen of Cryptosporidium parvum. Parasitol Res 2007; 101(4): 943-50.
7. Shayan P, Ebrahimzadeh E, Mokhber-Dezfouli MR, Rahbari S. Recombinant Cryptosporidium parvum p23 as a target for the detection of Cryptosporidium-specific antibody in calf sera. Parasitol Res 2008; 103(5): 1207-11.
8. Ebrahimzadeh M, Shayan P, Mokhber Dezfouli MR, Rahbari S. Recombinant Cryptosporidium parvum p23 as a Candidate Vaccine for Cryptosporidiosis. Iran J Parasitol 2009; 4(1): 1-7.
9. Borad A, Ward H. Human immune responses in cryptosporidiosis. Future Microbiol 2010; 5(3): 507-19.
10. Cevallos AM, Zhang X, Waldor MK, Jaison S, Zhou X, Tzipori S, et al. Molecular cloning and expression of a gene encoding Cryptosporidium parvum glycoproteins gp40 and gp15. Infect Immun 2000; 68(7): 4108–16.
11. O’Connor R, Wanyiri J, Cevallos A, Priest J, Ward HD. Cryptosporidium parvum glycoprotein gp40 localizes to the sporozoite surface by association with gp15. Mol Biochem Parasitol 2007; 156(1): 80–3.
12. Wanyiri JW, O’Connor R, Allison G, Kim K, Kane A, Qiu J, et al. Proteolytic Processing of the Cryptosporidium Glycoprotein gp40/15 by Human Furin and by a Parasite-Derived Furin-Like Protease Activit. Infect Immun 2007; 75(1): 184–92.
13. O’Connor RM, Kim K, Khan F, Ward HD. Expression of Cpgp40/15 in Toxoplasma gondii: a Surrogate System for the Study of Cryptosporidium Glycoprotein Antigens. Infect Immun 2003; 71(10): 6027–34.
14. O’Connor RM, Wanyiri J, Wojczyk B, Kim K, Ward H. Stable expression of Cryptosporidium parvum glycoprotein gp40/15 in Toxoplasma gondii. Mol Biochem Parasitol 2007; 152(2): 149–58.
15. Tilley M, Upton SJ, Fayer R, Barta JR, Chrisp CE, Freed PS, et al. Identification of a 15-kilodalton surface glycoprotein on sporozoites of Cryptosporidium parvum. Infect Immun 1991; 59(3): 1002–7.
16. Leav BA, Mackay MR, Anyanwu A, O’ Connor RM, Cevallos AM, Kindra G, et al. Analysis of Sequence Diversity at the Highly Polymorphic Cpgp40/15 Locus among Cryptosporidium Isolates from Human Immuno deficiency Virus-Infected Children in South Africa. Infect Immun 2002; 70(7): 3881–90.
17. Sambrook J, Russel DW. Molecular cloning: A laboratory manual, third edition. Plainview: Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor New York; 2001.
18. Lan DT, Lan TT, Viet LQ, Quyet PV, Quang HT, Loc NH, et al. Cloning and expression of gene encoding P23 protein from Cryptosporidium parvum. J BioSci Biotech 2014; 3(3): 189-93.
19. Ahmadi AH, Honari H, Minaei ME. Cloning, Fusion, and Expression of Domain a-1 Protective Antigen (PA20) of Bacillus anthracis and N-Terminal ipaD Gene of Shigella in E. coli. Qom Univ Med Sci J 2015; 9(4): 20-9. [in Persian]
20. Bradford MM. Arapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal Biochem 1979; 72: 248-54.
21. Rossle NF, Latif B. Cryptosporidiosis as threatening health problem: A review. Asian Pac J Trop Biomed 2013; 3(11): 916–24.
22. Manque PA, Tenjo F, Woehlbier U, Lara AM, Serrano MG, Xu P, et al. Identification and immunological characterization of three potential vaccinogens against Cryptosporidium species. Clin Vaccine Immunol 2011; 18(11): 1796-802.
23. Allison GM, Rogers KA, Borad A, Ahmed S, Karim MM, Kane AV, et al. Antibody responses to the immunodominant Cryptosporidium gp15 antigen and gp15 polymorphisms in a case-control study of cryptosporidiosis in children in Bangladesh. Am J Trop Med Hyg 2011; 85(1): 97-104.
24. Liu K, Zai D, Zhang D, Wei Q, Han G, Gao H, et al. Divalent Cp15-23 vaccine enhances immune responses and protection against Cryptosporidium parvum infection. Parasite Immunol 2010; 32(5): 335-44.
25. Strong W B, Gut J, Nelson Richar G. Cloning and Sequence Analysis of a Highly Polymorphic Cryptosporidium parvum Gene Encoding a 60-Kilodalton Glycoprotein and Characterization of Its 15- and 45-Kilodalton Zoite Surface Antigen Products. Infect Immun 2000; 68(7): 4117–34.
ارسال پیام به نویسنده مسئول

ارسال نظر درباره این مقاله
نام کاربری یا پست الکترونیک شما:

کد امنیتی را در کادر بنویسید >


XML   English Abstract   Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Sobati H, Jasor -Gharebagh H, Honari H. Expression of the protein gp40/15 Cryptosporidium parvum in E. coli. Feyz. 2016; 20 (1) :73-80
URL: http://feyz.kaums.ac.ir/article-1-2977-fa.html

ثباتی حسین، جسور قره باغ حبیب، هنری حسین. بررسی بیان پروتئین gp40/15 کریپتوسپوریدیوم پارووم در E. coli. دوماه نامه علمي ـ پژوهشي فيض. 1395; 20 (1) :73-80

URL: http://feyz.kaums.ac.ir/article-1-2977-fa.html



دوره 20، شماره 1 - ( دوماه نامه 1395 ) برگشت به فهرست نسخه ها
مجله علمی پژوهشی فیض ::: دانشگاه علوم پزشکی کاشان KAUMS Journal ( FEYZ )
Persian site map - English site map - Created in 0.05 seconds with 31 queries by YEKTAWEB 3663