سابقه و هدف: توکسوپلاسما گوندی، انگل تک‌یاخته درون سلولی اجباری و عامل توکسوپلاسموزیس در انسان و حیوانات بوده که در سراسر جهان انتشار دارد. پروتئین میکرونم 3 (MIC3) با وزن ملکولی 90 کیلو دالتون، عامل چسبیدن انگل به سلولهای میزبان در آغاز تهاجم است و در تمام مراحل تکاملی از انگل ترشح شده و یک آنتی ژن قوی محسوب می شود؛ از این نظر علاوه بر ایمونوژن بودن و کاندید ساخت واکسن، در تشخیص نیز کاربرد دارد. هدف از این تحقیق، آماده سازی ژن MIC3 در پلاسمید ناقل جهت ساب‌کلونینگ در پلاسمیدهای یوکاریوت و پروکاریوت است.
مواد و روش ها: DNA ژنومی توکسوپلاسما، با روش فنل-کلروفرم استخراج شد. با استفاده از آغازگرهای اختصاصی ژن MIC3، ژن مورد نظر با روش PCR تکثیر شده و با استفاده از ژل آگارز، الکتروفورز گردید. محصول PCR، خالص شده و به‌کمک آنزیم T4DNA Ligase، به‌داخل یک وکتور کلونینگ کلون شد. در نهایت پلاسمید نوترکیب به‌داخل E.coli سوش TOP10 ترانسفورم گردید. با روش های PCR و برش آنزیمی و توالی یابی، کلون مورد نظرتائید شد.
نتایج: محصول PCR به‌صورت یک باند 1052 جفت باز در ژل آگارز 1 درصد مشاهده گردید. پلاسمیدهای نوترکیب تحت برش آنزیمی دو آنزیم محدود کننده HindIII و EcoRV قرار گرفت و دو باند 1052 و 2886 جفت باز به‌دست آمد که نشان داد قطعه MIC3 در پلاسمید pTZ57R/T کلون شده است.
نتیجه گیری: نتایج به‌دست آمده نشان داد، کلونینگ و ترانسفورم ژن MIC3 در پلاسمید pTZ57R/T با موفقیت انجام شده است.
Jafari-Modrek M, Ghaffarifar F, Sharifi Z, Dalimi-Asl A. Cloning and sequencing the plasmid encoding Toxoplasma gondii Microneme 3 protein . Feyz Med Sci J 2011; 15 (3) :200-206 URL: http://feyz.kaums.ac.ir/article-1-1239-fa.html
.png){kind=logo}
