fa طراحی و تولید واکسن DNA پلی توپ حاوی ژن HBsAg برای ایجاد ایمنی محافظ علیه ویروس هپاتیت سی عمومى General پژوهشي Research <p style="DIRECTION: rtl"><strong>سابقه و هدف:</strong> با توجه به اثر تضعیف کنندگی سیستم ایمنی و موتاسیون­های شایع در برخی آنتی ژن­های ویروس هپاتیت سی ( HCV )، القاء پاسخ متمرکز سلول­های TCD8+ بر اپی­توپ­های نامتغیر و مهم ویروس در قالب یک واکسن چند اپی توپی می­تواند مانع از مزمن شدن بیماری گردد. </p><p><strong>مواد و روش­ها:</strong> این مطالعه به صورت تجربی صورت گرفت؛ به این ترتیب که دو اپی­توپ غالب وابسته به HLA-A2 انسانی (شامل E2614-622 و NS31406-1415 ) و دو اپی توپ وابسته به H-2d موشی ( E2405-414 و core132-142 ) در یک ترادف پیش بینی شده توسط آنالیزهای ایمونوانفورماتیکی طراحی شده و توالی نوکلئوتیدی متناظر پس از ساخت به صورت متصل به آنتی ژن سطحی ویروس هپاتیت بی ( HBsAg ) و نیز جدای از آن در وکتور pcDNA3.1 کلون شد. دو پلاسمید ساخته شده (به ترتیب pcDNA3.1.HPOL و pcDNA3.1.POL ) از نظر بیان و ترشح پروتئین در رده سلولی Cos-7 ارزیابی شدند. به دنبال ایمن سازی موش­های BALB/c (6 موش در هر گروه) با رژیم­های مختلف تزریق DNA و پپتید، میزان فعالیت لنفوسیت­های TCD8+ همچنین نوع و قدرت محافظت پاسخ ایجاد شده، مورد ارزیابی قرار گرفت. جهت انجام آنالیز آماری از آزمون­های t و Mann Whitney U و ANOVA استفاده گردید. </p><p><strong>نتایج:</strong> علی­رغم ایجاد پاسخ اختصاصی اپی توپ­ها در موش­های ایمن شده با پلاسمید pcDNA3.1.POL ، گروه دریافت کننده pcDNA3.1.HPOL افزایش معنی داری را در تعداد و فعالیت لنفوسیت­های TCD8+ نشان داد (05/0>P). تزریق یادآور این گروه با پپتید (مخلوط شده با دو اجوانت سازگار در انسان) تقویت بیشتر سلول­های CD8+ ، القاء پاسخ Th1 و مهار رشد مدل توموری را به دنبال داشت (05/0>P).</p><p><strong>نتیجه­گیری:</strong> اتصال HBsAg به عنوان یک توالی سازنده ذره و منبع اپی توپ­های کمکی در کنار رژیم تزریقی DNA-prime/peptide-boost دو استراتژی امید بخش برای تقویت واکسن­های CTL چند اپی توپی علیه HCV می باشند. </p> <p><font face="tahoma,arial,helvetica,sans-serif"><strong>Background:</strong> Considering the immunosuppressive effects and prevalent mutations in some HCV antigens, induction of CD8+ T cell responses is focused on conserved and critical epitopes which as a multi-epitope vaccine can prevent the chronic nature of the disease. </font></p><p><font face="tahoma,arial,helvetica,sans-serif"><strong>Materials and Methods:</strong> Two immunodominant HLA-A2-restricted human epitopes (E2614-622 and NS31406-1415) and two H-2d-restricted mouse epitopes (core132-142 and E2405-414) were designed in a sequential tandem, predicted by immunoinformatic analyses. Following the synthesis, related nucleotide sequence was cloned into the pcDNA3.1 vector with and without the fusion of hepatitis B surface antigen (HBsAg). Two constructed plasmids (pcDNA3.1.HPOL and pcDNA3.1.POL, respectively) were evaluated for the protein expression and secretion in Cos-7 cell line. After the vaccination of BALB/c mice (n=6 in each group) with different DNA and peptide immunization regimens, CD8+ T cell activity as well as the type and protective potency of the induced responses were evaluated.</font></p><p><font face="tahoma,arial,helvetica,sans-serif"><strong>Results:</strong> Despite the induction of epitope-specific responses in pcDNA3.1.POL injected mice, the group immunized with pcDNA3.1.HPOL indicated a significant increase in the number and activity of CD8+ T cells (P<0.05). Peptide boosting of this group (formulated in two human-compatible adjuvant) still led to the more activation of CD8+ cells, induction of Th1 response and the inhibition of tumor model growth (P<0.05). </font></p><p><font face="tahoma,arial,helvetica,sans-serif"><strong>Conclusion:</strong> Fusion of HBsAg as a particle-forming sequence and the source of helper epitopes along the DNA-prime/peptide-boosting immunization regimen are proposed as two promising strategies to improve the CTL multi-epitope vaccines against HCV. </font></p> هپاتیت سی، واکسن های DNA، آنتی ژن سطحی ویروس هپاتیت بی، آنتی ژن HLA-A0201، اپی توپ Hepatitis C, Vaccines DNA, Hepatitis B surface antigen, HLA-A0201 antigen, Epitopes 161 173 http://feyz.kaums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-705&slc_lang=fa&sid=1 Arash Memarnejadian آرش معمارنژادیان 290031947532846003661 290031947532846003661 No انستیتوپاستور ایران Farzin Roohvand فرزین روحوند farzin.roohvand@gmail.com 290031947532846003662 290031947532846003662 Yes Fatemeh Motevalli فاطمه متولی 290031947532846003663 290031947532846003663 No Mohammad reza Aghasadeghi محمد رضا آقاصادقی 290031947532846003664 290031947532846003664 No