fa ساب کلونینگ ژن آنزیم گلوکوسربروزیداز موش سوری در وکتور لنتی ویرال و انتقال آن به رده سلولی HEK عمومى General پژوهشي Research <p align="justify"><strong>سابقه و هدف:</strong> ژن‌درمانی یکی از مهم­ترین شیوه‌های تحقیقات بالینی است که ارایه‌دهنده­ی روش‌های جدیدی برای درمان نقص‌های ژنتیکی می‌باشد. نقص ژنتیکی آنزیم گلوکوسربروزیداز ( Gba ) عامل بیماری گوشه بیش از بقیه‌ی بیماری‌ها در ژن‌درمانی مورد توجه قرار گرفته است. هدف از انجام این پروژه کلونینگ و انتقال ژن آنزیم گلوکوسربروزیداز توسط لنتی ویرال وکتور ارتقایافته به رده‌ی سلول‌های HEK می‌باشد. </p><p align="justify"><strong>مواد و روش‌ها:</strong> مطالعه به روش تجربی و به منظور تولید و تکثیر cDNA ژن آنزیم گلوکوسربروزیداز به کمک پرایمرهای اختصاصی به روش PCR انجام گرفت و در وکتور غیر بیان‌کننده، کلون و ترادف‌یابی گردید. سپس ژن نوترکیب را در لنتی ویرال وکتور ارتقایافته دارای ژن گزارش‌گر GFP ساب کلون شد. پس از کشت سلول‌های HEK وکتور نوترکیب لنتی ویرال به آنها منتقل شد و انتقال ژن Gba با استفاده از ژن گزارش‌گر GFP بررسی گردید. </p><p align="justify"><strong>نتایج:</strong> تکثیر و کلونینگ ژن آنزیم گلوکوسربروزیداز با استفاده از آنزیم‌های محدودگر تایید گردید. ترادف‌های ژن Gba با ترادف‌های گزارش شده­ی آن کاملا تطبیق داشت. ساب کلونینگ ژن Gba در وکتور لنتی ویرال با استفاده از آنزیم‌های محدودکننده‌ی مختلف تایید شد. انتقال ژن نوترکیب Gba توسط بیان ژن گزارش‌گر با استفاده از پروتئین‌های فلورسنتی تایید گردید. </p><p align="justify"><strong>نتیجه‌گیری:</strong> در این تحقیق بخشی از فرآیند پروتکل ژن‌درمانی با انتقال ژن آنزیم گلوکوسربروزیداز موش به سلول‌های HEK توسط وکتور لنتی ویرال انجام گرفت. </p> <p align="justify"><strong>Background: </strong>Gene therapy is an important technique in clinical research which offers new visions for the treatment of genetic deficiencies. Gaucher disease caused by genetic deficiency of glucocerebrosidase (Gba) enzyme has attracted special consideration in gene therapy. The aim of this project is cloning and transfering of glucocerebrosidase enzyme gene to HEK cell line by enhanced lentiviral vector. </p><p align="justify"><strong>Materials and Methods: </strong>The cDNA of glucocerebrosidase enzyme gene was synthesized, amplified with specific primers by PCR methods, cloned in non-expressing vector and sequenced. The recombinant gene was subcloned in enhanced lentiviral vector by GFP reporter gene. After culturing the HEK cell line, the recombinant lentiviral vector was transferred to them and the transfer of Gba gene was examined by GFP reporter gene. </p><p align="justify"><strong>Results: </strong>The amplification and cloning of glucocerebrosidase enzyme gene was confirmed by restrictive enzymes. The sequence of Gba gene was compared correctly by its reported sequence. Subcloning of Gba gene in lentiviral vector was confirmed by different restrictive enzymes. The transfer of Gba recombinant gene was confirmed by reporter gene with flurecent proteins. </p><p align="justify"><strong>Conclusion: </strong>This project is a part of gene therapy protocol performed by the transferring of mouse glucocerebrosidase enzyme gene to HEK cells by lentiviral vector. </p> ژن‌درمانی، انتقال ژن، گلوکوسربروزیداز Gene therapy, Gen transfer, glucocerebrosidase 1 7 http://feyz.kaums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-52&slc_lang=fa&sid=1 Homayou Naderian همایون نادریان Naderian_H@kaums.ac.ir 29003194753284600435 29003194753284600435 Yes Bahram Kazemi بهرام کاظمی 29003194753284600436 29003194753284600436 No AF De Vries آنتوآن دو وریس 29003194753284600437 29003194753284600437 No