Feyz Medical Sciences Journal
مجله علوم پزشکی فيض
Feyz
Medical Sciences
http://feyz.kaums.ac.ir
29
journal29
1029-7855
2008-9821
fa
jalali
1386
7
1
gregorian
2007
10
1
11
3
online
1
fulltext
fa
تخلیص Inhibin از مایع فولیکولی انسان با استفاده از آنتیبادی تک دودمانی
Purification of inhibin from human follicular fluid using monoclonal antibody
عمومى
General
پژوهشي
Research
<p align="justify"><strong>سابقه و هدف</strong>: Inhibin پروتئینی است که در پاسخ به اثر FSH توسط سلولهای گرانولوزا و سرتولی ترشح میشود و باعث کنترل ترشح FSH از هیپوفیز قدامی میگردد. ارزیابی این پروتئین نقش ارزندهای در آگاهی از وضعیت باروری در زنان و همچنین پیشآگهی از ابتلای جنین به سندروم داون و پرهاکلامپسی دارد. اندازهگیری غلظت Inhibin در ارزیابی وضعیت باروری مردان نیز دارای اهمیت میباشد. تا کنون روشهای مختلف و طولانی برای تخلیص Inhibin معرفی گردیده است. هدف از این تحقیق خالصسازی Inhibin از مایع فولیکولی با روش ایمونوافینیتی میباشد. </p><p align="justify"><strong>مواد و روش ها:</strong> مایع فولیکولی جمعآوری شده از زنان مراجعهکننده به مرکز درمانی ابنسینا، پس از فیلتراسیون توسط محلول سولفات آمونیوم اشباع، تغلیظ گردید. جهت جداسازی Inhibin ، از روش ایمونوافینیتی بر روی ستون کروماتوگرافی جذبی به کمک آنتیبادی تکدودمانی علیه Inhibin استفاده شد . پس از عبور مایع فولیکولی از ستون کروماتوگرافی جذبی ، محلول پروتئینی به دست آمده به کمک روش SDS-PAGE و وسترن بلات ارزیابی شد. </p><p align="justify"><strong>نتایج:</strong> وجود تک باند 32 کیلودالتونی بعد از رنگآمیزی نقره موید حضور Inhibin بود. نتیجهی آزمون وسترن بلات نشاندهندهی شناسایی اپیتوپ توسط آنتیبادی علیه Inhibin میباشد. راندمان ستون در جداسازی Inhibin با استفاده از روش کروماتوگرافی افینیتی 92 درصد میباشد. </p><p align="justify"><strong>نتیجهگیری :</strong> این روش در مقایسه با بسیاری از روشهای بیوشیمیایی از راندمان بالایی برخوردار میباشد. با این حال به دلیل عدم دسترسی به مایع فولیکولی انسان در حجم انبوه، تخلیص Inhibin توسط روش ذکر شده در این مقاله بیشتر برای کاربردهای آزمایشگاهی در مقادیر کم بوده و در مقادیر انبوه تولید Inhibin نوترکیب توصیه میشود. </p>
<p align="justify"><strong>Background: </strong>Inhibin is a protein synthesized by granulosa and sertoli cells which preferentially inhibit pituitary secretion of FSH through a negative-feedback. Studies have showed that measurement of inhibin has a clinical role in understanding the fertility status of men and women and could also be used as a prognostic marker for pre-eclampsia and Down syndrome in fetus. There are many different multi-step procedures for the purification of inhibin. In this study we attempted to purify inhibin from human follicular fluid using immunoaffinity techniques. </p><p align="justify"><strong>Materials and Methods: </strong>Follicular fluid (FF) collected from women referring to Avicenna Infertility Clinic, was filtrated and subsequently concentrated by ammonium sulfate. The presence of inhibin in follicular fluid was detected using enzyme-linked immunosorbent assay . In order to purify inhibin, an affinity chromatography column using anti-inhibin monoclonal antibody was prepared. The purified protein was analyzed through SDS-PAGE and western blotting after a protein solution load of human inhibin into the column. </p><p align="justify"><strong>Results: </strong>The SDS-PAGE results of affinity proved the presence of inhibin following silver staining appeared as a single 32 kDa band . Western blotting revealed that specific anti-inhibin antibody was able to recognize inhibin epitopes. The present protocol for purification of inhibin is a technique with 92% yield. </p><p align="justify"><strong>Conclusion: </strong>This method is a sensitive procedure for high yielded productions of inhibin compared to the previously described methods, using HPLC and gel filtration. However, since preparing and obtaining follicular fluid, as a main source of inhibin, is rather difficult but suitable for laboratories, recombinant inhibin is recommended for mass production. </p>
Inhibin، مایع فولیکولی، تخلیص، آنتی بادی تک دودمانی
Follicular fluid, Inhibin, Monoclonal antibody, Purification
24
30
http://feyz.kaums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-45&slc_lang=fa&sid=1
Mohammad Reza
Sadeghi
محمد رضا
صادقی
Sadeghi@avicenna.ac.ir
29003194753284600404
29003194753284600404
Yes
Mahshid
Hodjat
مهشید
حجت
29003194753284600405
29003194753284600405
No
Nima
Naseri
نیما
ناصری
29003194753284600406
29003194753284600406
No
Mahmoud
Jeddi-Tehrani
محمود
جدی تهرانی
29003194753284600407
29003194753284600407
No
Nariman
Mosaffa
نریمان
مصفا
29003194753284600408
29003194753284600408
No
Mohammad Mahdi
Akhondi
محمد مهدی
آخوندی
29003194753284600409
29003194753284600409
No
Roya
Ghods
رویا
قدس
29003194753284600410
29003194753284600410
No
Ali Ahmad
Bayat
علی احمد
بیات
29003194753284600411
29003194753284600411
No