fa تخلیص Inhibin از مایع فولیکولی انسان با استفاده از آنتی‌بادی تک دودمانی عمومى General پژوهشي Research <p align="justify"><strong>سابقه و هدف</strong>: Inhibin پروتئینی است که در پاسخ به اثر FSH توسط سلول‌های گرانولوزا و سرتولی ترشح می‌شود و باعث کنترل ترشح FSH از هیپوفیز قدامی می‌گردد. ارزیابی این پروتئین نقش ارزنده‌‌ای در آگاهی از وضعیت باروری در زنان و همچنین پیش­آگهی از ابتلای جنین به سندروم داون و پره‌اکلامپسی دارد. اندازه­گیری غلظت Inhibin در ارزیابی وضعیت باروری مردان نیز دارای اهمیت می­باشد. تا کنون روش­های مختلف و طولانی برای تخلیص Inhibin معرفی گردیده است. هدف از این تحقیق خالص­سازی Inhibin از مایع فولیکولی با روش ایمونوافینیتی می­باشد. </p><p align="justify"><strong>مواد و روش ­ ها:</strong> مایع فولیکولی جمع­آوری شده از زنان مراجعه­کننده به مرکز درمانی ابن­سینا، پس از فیلتراسیون توسط محلول سولفات آمونیوم اشباع، تغلیظ گردید. جهت جداسازی Inhibin ، از روش ایمونوافینیتی بر روی ستون کروماتوگرافی جذبی به کمک آنتی­بادی تک­دودمانی علیه Inhibin استفاده شد . پس از عبور مایع فولیکولی از ستون کروماتوگرافی جذبی ، محلول پروتئینی به دست آمده به کمک روش SDS-PAGE و وسترن بلات ارزیابی شد. </p><p align="justify"><strong>نتایج:</strong> وجود تک باند 32 کیلودالتونی بعد از رنگ‌آمیزی نقره موید حضور Inhibin بود. نتیجه­ی آزمون وسترن بلات نشان­دهنده­ی شناسایی اپی­توپ توسط آنتی­بادی علیه Inhibin می‌باشد. راندمان ستون در جداسازی Inhibin با استفاده از روش کروماتوگرافی افینیتی 92 درصد می­باشد. </p><p align="justify"><strong>نتیجه­گیری :</strong> این روش در مقایسه با بسیاری از روش‌های بیوشیمیایی از راندمان بالایی برخوردار می‌باشد. با این حال به دلیل عدم دسترسی به مایع فولیکولی انسان در حجم انبوه، تخلیص Inhibin توسط روش ذکر شده در این مقاله بیشتر برای کاربردهای آزمایشگاهی در مقادیر کم بوده و در مقادیر انبوه تولید Inhibin نوترکیب توصیه می­شود. </p> <p align="justify"><strong>Background: </strong>Inhibin is a protein synthesized by granulosa and sertoli cells which preferentially inhibit pituitary secretion of FSH through a negative-feedback. Studies have showed that measurement of inhibin has a clinical role in understanding the fertility status of men and women and could also be used as a prognostic marker for pre-eclampsia and Down syndrome in fetus. There are many different multi-step procedures for the purification of inhibin. In this study we attempted to purify inhibin from human follicular fluid using immunoaffinity techniques. </p><p align="justify"><strong>Materials and Methods: </strong>Follicular fluid (FF) collected from women referring to Avicenna Infertility Clinic, was filtrated and subsequently concentrated by ammonium sulfate. The presence of inhibin in follicular fluid was detected using enzyme-linked immunosorbent assay . In order to purify inhibin, an affinity chromatography column using anti-inhibin monoclonal antibody was prepared. The purified protein was analyzed through SDS-PAGE and western blotting after a protein solution load of human inhibin into the column. </p><p align="justify"><strong>Results: </strong>The SDS-PAGE results of affinity proved the presence of inhibin following silver staining appeared as a single 32 kDa band . Western blotting revealed that specific anti-inhibin antibody was able to recognize inhibin epitopes. The present protocol for purification of inhibin is a technique with 92% yield. </p><p align="justify"><strong>Conclusion: </strong>This method is a sensitive procedure for high yielded productions of inhibin compared to the previously described methods, using HPLC and gel filtration. However, since preparing and obtaining follicular fluid, as a main source of inhibin, is rather difficult but suitable for laboratories, recombinant inhibin is recommended for mass production. </p> Inhibin، مایع فولیکولی، تخلیص، آنتی بادی تک دودمانی Follicular fluid, Inhibin, Monoclonal antibody, Purification 24 30 http://feyz.kaums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-45&slc_lang=fa&sid=1 Mohammad Reza Sadeghi محمد رضا صادقی Sadeghi@avicenna.ac.ir 29003194753284600404 29003194753284600404 Yes Mahshid Hodjat مهشید حجت 29003194753284600405 29003194753284600405 No Nima Naseri نیما ناصری 29003194753284600406 29003194753284600406 No Mahmoud Jeddi-Tehrani محمود جدی تهرانی 29003194753284600407 29003194753284600407 No Nariman Mosaffa نریمان مصفا 29003194753284600408 29003194753284600408 No Mohammad Mahdi Akhondi محمد مهدی آخوندی 29003194753284600409 29003194753284600409 No Roya Ghods رویا قدس 29003194753284600410 29003194753284600410 No Ali Ahmad Bayat علی احمد بیات 29003194753284600411 29003194753284600411 No