Feyz Medical Sciences Journal

fa کلون سازی و بررسی بیان ژن nlpD اسینتوباکتر بومانی در سلول های HDF انسان به روش RT-PCR Gene cloning and evaluation of the Acinetobacter baumannii nlpD gene expression in human dermal fibroblast cells using RT-PCR عمومى General پژوهشي Research <div style="text-align: justify;">سابقه و هدف: اسینتوباکتر بومانی یکی از باکتری های بسیار مقاوم در برابر انواع آنتی بیوتیک ها در جهان است. این باکتری عامل عفونت های بیمارستانی به صورت بومی یا همه گیر بوده و هنوز واکسن موثری علیه آن وجود ندارد. NlpD یکی از عوامل آنتی ژنی مهم است که سبب تحریک سیستم ایمنی میزبان می گردد. بنابراین، هدف از این تحقیق، کلونسازی و بررسی بیان ژن nlpD باکتری اسینتوباکتر بومانی در سلول های HDF (Human dermal fibroblast) است. مواد و روش ها: در این تحقیق تجربی ژن nlpD از روی ژنوم اسینتوباکتر بومانی با استفاده از روش PCR تکثیر شد. سپس، ژن مذکور به ترتیب در ناقل های pTZ57R/T و pIRES2-EGFP کلونسازی و سابکلون گردید. تایید صحت کلون سازی ژن با سه روش PCR، آنزیم های برش دهنده و تعیین توالی مورد ارزیابی قرار گرفت. سپس، ناقل نوترکیب نهایی pIRES2-EGFP-nlpD با کمک الکتروپوریشن به سلول های HDF منتقل گردید و بیان ژن هدف در این سلول ها با روش RT-PCR بررسی شد. نتایج: قطعه 831 جفت بازی مربوط به ژن nlpD اسینتوباکتر بومانی با موفقیت تکثیر شد. هم چنین، نتایج تحقیق نشان داد که سازواره نهایی pIRES2-EGFP-nlpD تشکیل گریده است. مشاهده باند 831 جفت بازی پس از انجام RT-PCR، در سلول های ترانسفورم شده نسبت به سلول های شاهد، موید بیان ژن nlpD در سلول هایHDF می باشد. نتیجه گیری: سازواره نهایی ساخته شده در این تحقیق توان بیان ژن nlpD اسینتوباکتر بومانی را در سلول های یوکاریوتی دارد. بیان موفق ژن هدف می تواند در راستای بررسی ایمنی زایی در حیوانات آزمایشگاهی به عنوان یک واکسن نوترکیب مدنظر قرار گیرد. هم چنین، سازواره pIRES2-EGFP-nlpD از پتانسیل لازم برای بررسی به عنوان واکسن ژنی در تحقیقات آینده برخوردار است.</div> <div style="text-align: justify;">Background:  Acinetobacter baumannii is one of the highly antibiotic-resistant bacteria in the world. This bacterium is a cause of endemic and epidemic nosocomial infections and despite many efforts, there is still no effective vaccine agains it. NlpD is one of the important antigenic agents that stimulate the immune system. So, the aim of this study was to examine gene cloning and expression of the nlpD gene of A. baumannii in human dermal fibroblast (HDF) cells. Materials and Methods: In this experimental study, the nlpD gene was amplified from A. baumannii genome using polymerase chain reaction (PCR). Then, the nlpD gene was cloned and sub-cloned in pTZ57R/T and pIRES2-EGFP vectors, respectively. Confirmation of gene cloning was performed by PCR, restriction endonuclease and sequencing methods. The final pIRES2-EGFP-nlpD recombinant vector was transformed into HDF cells using electroporation and the expression of target gene was evaluated by RT-PCR. Results: In this study, the 831 bp nlpD gene of A. baumannii was amplified successfully. Also, the results of the study showed that the recombinant pIRES2-EGFP-nlpD final construct was produced. Observation of the 831 bp band on agarose gel in transformed cells compared to control cells confirmed the nlpD gene expression in HDF cells. Conclusion: The final construct that generates in this study can express the nlpD gene of A. baumannii in eukaryotic cells. Successful expression of the target gene can be used as a new recombinant vaccine in animal model. The pIRES2-EGFP-nlpD recombinant vector has also the potential as a gene vaccine for future research.</div> اسینتوباکتر بومانی, nlpD, بیان ژن, RT-PCR Acinetobacter baumannii, nlpD, Gene expression, RT-PCR 359 366 http://feyz.kaums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-2188-1&slc_lang=fa&sid=1 Rasoul Hashemzehi رسول هاشم زهی ras.hashem@yahoo.com 2900319475328460018881 2900319475328460018881 No Department of Molecular Genetics, Fars Science and Research Branch, Islamic Azad University, Shiraz, I. R. Iran. گروه ژنتیک مولکولی، واحد علوم و تحقیقات فارس، دانشگاه آزاد اسلامی، شیراز Abbas Doosti عباس دوستی abbasdoosti@yahoo.com 2900319475328460018882 2900319475328460018882 Yes Biotechnology Research Center, Shahrekord Branch, Islamic Azad University, Shahrekord, I. R. Iran. گروه ژنتیک مولکولی، واحد مرودشت، دانشگاه آزاد اسلامی، مرودشت Mohammad Kargar محمد کارگر microkargar@gmail.com 2900319475328460018883 2900319475328460018883 No Department of Microbiology, Jahrom Branch, Islamic Azad University, Jahrom, I. R. Iran. گروه میکروبیولوژی، واحد جهرم، دانشگاه آزاد اسلامی، جهرم Mojtaba Jaafarinia مجتبی جعفری نیا newsgenetic@yahoo.com 2900319475328460018884 2900319475328460018884 No Department of Molecular Genetics, Marvdasht Branch, Islamic Azad University, Marvdasht, I. R. Iran. گروه ژنتیک مولکولی، واحد مرودشت، دانشگاه آزاد اسلامی، مرودشت