fa بررسی میزان ترشح خارج سلولی پپتید ضد سرطان VEGF111b در سلول های انسانی HEK-293 عمومى General پژوهشي Research <p dir="RTL" style="text-align: justify;"><strong>سابقه و هدف:</strong> <span dir="LTR">VEGF111b</span> یک ایزوفرم جدید از فاکتورهای رشد اندوتلیال عروقی <span dir="LTR">(VEGF)</span> است که اخیرا به&shy; عنوان یک داروی ضد سرطان مطرح شده است. هدف مطالعه حاضر بررسی میزان ترشح این پروتئین از دیواره سلول&shy; های <span dir="LTR">HEK293</span> به&shy; منظور تولید تجاری این فاکتور نوترکیب است.</p> <p dir="RTL" style="text-align: justify;"><strong>مواد و روش ها: </strong>توالی <span dir="LTR">VEGF111b</span> توسط نرم&shy;افزار <span dir="LTR">OLIGO</span> و اطلاعات ژن بانک <span dir="LTR">NCBI</span> طراحی و داخل وکتور<span dir="LTR"> pBUD.cE4.1</span>کلون شد. وکتور نوترکیب <span dir="LTR">pBUD.VEGF111b</span> با استفاده از کیت لیپوفکتامین به داخل سلول&shy; های <span dir="LTR">HEK293</span> ترانسفکت شد. تولید <span dir="LTR">VEGF111b</span> 48 ساعت بعد از ترانسفکشن در عصاره لیز سلولی توسط وسترن بلاتینگ و آنتی &shy;بادی<span dir="LTR">Human anti-VEGF </span>&nbsp;بررسی شد. میزان ترشح <span dir="LTR">VEGF111b</span> در عصاره لیز سلولی و محیط کشت سلولی به روش <span dir="LTR">ELISA</span> اندازه گیری گردید.</p> <p dir="RTL" style="text-align: justify;"><strong>نتایج:</strong> کلونیتگ صحیح قطعه<span dir="LTR">VEGF111b </span>&nbsp;در وکتور <span dir="LTR">pBUD.cE4.1</span> توسط هضم آنزیمی و ژل الکتروفورز تائید شد. مشاهده باند شارپ 12 کیلودالتن در نتایج وسترن بلات عصاره لیز سلولی نشان&shy;گر تولید پپتید نوترکیب <span dir="LTR">VEGF111b</span> در سلول&shy; های <span dir="LTR">HEK293</span> بود. نتایج الایزا در جذب نوری 450 نانومتر برای <span dir="LTR">&nbsp;VEGF111b</span>در محیط کشت سلولی و عصاره لیز سلولی به&shy; ترتیب برابر با 2/81<span dir="LTR">&plusmn;</span>19/20 <span dir="LTR">pg/ml</span> و &nbsp;<span dir="LTR">pg/ml</span>7/42<span dir="LTR">&plusmn; </span>32/87 بود. و در نمونه &shy;های کنترل منفی بیان <span dir="LTR">VEGF-111b</span> مشاهده نشد.</p> <p dir="RTL" style="text-align: justify;"><strong>نتیجه گیری:</strong> یافته های این مطالعه نشان&shy;گر قابلیت بالای انتقال و ترشح <span dir="LTR">VEGF111b</span> از دیواره سلول<span dir="LTR">&shy;</span> های <span dir="LTR">HEK293</span> به محیط کشت سلولی بدون شکستگی و هضم پروتئولیتیکی است. به &shy;نظر می&shy; رسد تولید تجاری این پپتید دارویی و تخلیص از محیط کشت سلولی <span dir="LTR">HEK293</span> با بازدهی بالا امکان&shy; پذیر باشد.</p> <p style="text-align: justify;"><span style="font-family:times new roman;"><strong>Background:</strong> VEGF111b is a new isoform of vascular endothelial growth factor (VEGF) recently considered as a new anticancer drug. The aim of this study was to evaluate the VEGF111b secretion from HEK293 cell wall in order to commercial production of this recombinant factor.</span></p> <p style="text-align: justify;"><span style="font-family:times new roman;"><strong>Materials and Methods:</strong> After the design of VEGF111b sequence using OLIGO software and NCBI gene bank data, it was cloned into the pBUD.cE4.1 vector. The pBUD.VEGF111b recombinant vector was transfected into HEK293 cells using lipofectamine kit. Forty-eight hours after the transfection the production of VEGF111b was estimated by Western blotting and Human anti VEGF antibody. The VEGF111b secretion &nbsp;&nbsp;into cell culture and cell lysate extract was measured using ELISA.&nbsp;&nbsp;</span></p> <p style="text-align: justify;"><span style="font-family:times new roman;"><strong>Results:</strong> The correct cloning of VEGF111b into pBUD.cE4.1vector was confirmed using enzymatic digestion and gel electrophoresis. The observed production of recombinant peptide in HEK293 was confirmed with 12KDa band in cell lysate extract of Western blotting. The ELISA results at 450 nanometer absorbance for cell culture media and cell lysate extract were 19.20&plusmn;2.81 pg/ml and 32.87&plusmn;7.42 pg/ml, respectively. However, no VEGF111b expression was observed in negative controls.</span></p> <p style="text-align: justify;"><span style="font-family:times new roman;"><strong>Conclusion:</strong> The findings of this study indicate the powerful ability of &nbsp;&nbsp;transformation and secretion of VEGF111b from HEK293 cell &nbsp;wall to cell culture media with no breaking and proteolytic digestion. It seems that the commercial production and purification of this therapeutic peptide from HEK293 cell culture would be possible with high efficiency.</span></p> فاکتور رشد اندوتلیال عروقی A, ترشح, HEK293 Vascular Endothelial Growth Factor A, Secretion, HEK293 28 34 http://feyz.kaums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-176-1324&slc_lang=fa&sid=1 Morteza Sadeghi مرتضی صادقی ms.sadeghi@yahoo.com 2900319475328460017619 2900319475328460017619 Yes Human Genetic Research Center, Baqiyatallah Medical Sciences University, Tehran, I. R. Iran. مرکز تحقیقات ژنتیک انسانی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله، تهران Zohreh Hojati زهره حجتی 2900319475328460017620 2900319475328460017620 No Department of Biology, Faculty of Sciences, University of Isfahan, Isfahan, I. R. Iran. بخش ژنتیک، گروه زیست شناسی، دانشگاه اصفهان، اصفهان