fa طراحی، ترانسفورماسیون و تکثیر ایزوفرم نوترکیبVEGF111b در E. coli Top10 برای تولید داروی نوترکیب medicine, paraclinic medicine, paraclinic پژوهشي Research <p dir="RTL" style="text-align: justify;"><strong>سابقه و هدف:</strong> سنتز پروتئین&shy; های نوترکیب با خاصیت مهار گیرنده&shy; های رشد در تومورهای سرطانی یکی از راه&shy; های جدید درمان سرطان است. هدف مطالعه حاضر طراحی و کلون ایزوفرم نوترکیب<span dir="LTR">VEGF111b </span>&nbsp;در وکتور<span dir="LTR"> pBudCE4.1 </span>و بررسی سازگاری این سازه با&nbsp; باکتری <a name="OLE_LINK5"><em><span dir="LTR">E. coli </span></em></a><span dir="LTR">Top10</span> &nbsp;جهت تولید داروی نوترکیب است.&nbsp;</p> <p dir="RTL" style="text-align: justify;"><strong>مواد و روش &shy;ها:</strong> ایزوفرم جدید <span dir="LTR">VEGF111b</span> با استفاده از توالی&shy;های موجود در بانک&shy;های ژنی و نرم&shy;افزار <span dir="LTR">7</span> <span dir="LTR">&nbsp;oligo</span>طراحی شده و توسط آنزیم&shy;های <span dir="LTR">BGLII</span> و <span dir="LTR">KpnI</span> بریده شده و در پایین دست پروموتور <span dir="LTR">EF-1</span> در وکتور <span dir="LTR">pBudCE4.1</span> کلون شد. وکتور نوترکیب <a name="OLE_LINK4"></a><a name="OLE_LINK3"><span dir="LTR">pBud.VEGF111b</span></a> توسط روش کلرید کلسیم در باکتری <em><span dir="LTR">E. coli </span></em><span dir="LTR">Top10</span> ترانسفورم شد. جداسازی باکتری&shy; های نوترکیب در محیط <span dir="LTR">LBA</span> حاوی غلظت 3/0 و 5/0 درصد آنتی&shy;بیوتیک زئوسین انجام شد. در مرحله آخر وکتور نوترکیب با استفاده از کیت استخراج <span dir="LTR">DNA</span> از ژل (<span dir="LTR">Thermo K0513</span>) استخراج شده و وجود&nbsp; قطعه نوترکیب <span dir="LTR">VEGF111b</span> توسط هضم آنزیمی و تعیین توالی تائید شد.</p> <p dir="RTL" style="text-align: justify;"><strong>نتایج:</strong> الحاق قطعه <span dir="LTR">111b</span> در جایگاه مورد نظر تائید شد. تمامی کلونی<span dir="LTR">&shy;</span> های <em><span dir="LTR">E. coli</span></em><span dir="LTR"> Top10</span> مشاهده شده در محیط حاوی غلظت 0/5 درصد زئوسین حاوی قطعه نوترکیب <span dir="LTR">VEGF111b</span> بودند و در غلظت 0/3 درصد زئوسین، 61/9 درصد کلونی نوترکیب مشاهده شد. وجود توالی<span dir="LTR">VEGF111b </span>&nbsp;در باکتری &shy;های نوترکیب توسط هضم آنزیمی و تعیین توالی تائید شد.</p> <p dir="RTL" style="text-align: justify;"><strong>نتیجه گیری:</strong> مطالعه حاضر گامی مهم در جهت تولید داروی نوترکیب<span dir="LTR">VEGF111b </span>&nbsp;و بررسی عملکرد ضد سرطانی این پروتئین است. وکتور<span dir="LTR">pBudCE4.1</span> با دارا بودن 2 جایگاه کلونینگ و 8 جایگاه برش آنزیمی کاندید مناسبی برای کلونینگ و بیان پروتئین&shy; های نوترکیب در <em><span dir="LTR">E. coli </span></em><span dir="LTR">Top10</span> است.&nbsp;</p> <p style="text-align: justify;"><strong>Background:</strong> The synthesis of recombinant proteins with the aim of inhibiting the tumor receptors is one of the new approaches in cancer treatment. The aim of this study was to design and clone the VEGF 111b recombinant isoform in pBudCE4.1 vector and assess &nbsp;&nbsp;its compatibility with <em>E.coli</em> Top10 in order to produce some recombinant drugs.</p> <p style="text-align: justify;"><strong>Materials and Methods:</strong> The VEGF111b new isoform designed using gene sequences available in the databases and oligo 7 software was digested by BglII and KpnI enzymes. Then it was cloned at downstream of the EF-1 promoter in the pBudCE4.1vector.</p> <p style="text-align: justify;">Isolation of recombinant bacteria was done in LBA medium with the concentration of Zeocin antibiotic (3% and 5%). In the final step, the recombinant vector was extracted using DNA gel extraction kit and VEGF111b recombinant fragment was confirmed by enzyme digestion and sequencing.</p> <p style="text-align: justify;"><strong>Results: </strong>The ligation of 111b fragment in expected site was confirmed. The entire <em>E.coli </em>Top10 colonies were observed in Zeocin medium (5%) containing recombinant VEGF111b fragment and recombinant colonies (61.9%) were observed at Zeocin medium (3.0%). The existence of VEGF111b sequences in recombinant bacteria was confirmed by enzyme digestion and sequencing.</p> <p style="text-align: justify;"><strong>Conclusion: </strong>The present study is an important step in the production process of VEGF111b recombinant protein and evaluating its anticancer effect. Moreover, the pBudCE4.1 vector containing 2 cloning sites and 8 enzyme excision sites is a good candidate for cloning and expression of recombinant proteins in <em>E.coli</em> TOP10.</p> <p></p> E. coli , پروتئین نوترکیب, VEGF111b E.coli, Recombinant Protein, VEGF111b 447 453 http://feyz.kaums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-176-1304&slc_lang=fa&sid=1 Morteza Sadegi مرتضی صادقی ms.sadeghi@yahoo.com 2900319475328460017910 2900319475328460017910 Yes Genetic Research Center, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, I. R. Iran. مرکز تحقیقات ژنتیک انسانی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله Zohreh Hojjati زهره حجتی 2900319475328460017911 2900319475328460017911 No Department of Biology, Faculty of Science, Isfahan University, Isfahan, I. R. Iran. گروه زیست شناسی، دانشکده علوم، دانشگاه اصفهان