fa بررسی بیان پروتئین gp40/15 کریپتوسپوریدیوم پارووم در E. coli medicine, paraclinic medicine, paraclinic پژوهشي Research <p dir="RTL" style="text-align: justify;"><strong>سابقه و هدف: </strong>کریپتوسپوریدیوم یک انگل تک&shy; یاخته &shy;ای دارای اهمیت در پزشکی و دامپزشکی است که سبب اسهال و استفراغ در طیف وسیعی از مهره داران می&shy; شود. برخی از آنتی&shy;ژن&shy; های سطحی انگل از جمله <span dir="LTR">gp40/15</span> در اتصال و تهاجم به سلول میزبان و تحریک سیستم ایمنی نقش مهمی بر عهده دارند. با کلون و بیان نمودن این آنتی&shy;ژن&shy; ها امکان دسترسی به پروتئین &shy;های نوترکیب انگل فراهم می&shy; شود. هدف این مطالعه بیان ژن <span dir="LTR">gp40/15</span> کریپتوسپوریدیوم پارووم در باکتری اشرشیاکلی است.</p> <p dir="RTL" style="text-align: justify;"><strong>مواد و روش &shy;ها:</strong> توالی ژن <span dir="LTR">gp40/15</span> کریپتوسپوریدیوم پارووم از بانک ژن به&shy; شماره <span dir="LTR">AF155624</span> استخراج و به &shy;صورت صناعی در <span dir="LTR">PET28a+</span> کلون و تهیه گردید. جهت تایید از روش &shy;های <span dir="LTR">ColonyPCR </span>و هضم آنزیمی به &shy;وسیله آنزیم &shy;های محدودکننده <span dir="LTR">BamHI</span> و<span dir="LTR">XhoI </span>&nbsp;استفاده شد. پلاسمید نوترکیب به داخل باکتری اشرشیاکلی منتقل شده و بیان پروتئین با استفاده از <span dir="LTR">SDS-PAGE</span>، وسترن بلات و الایزا با استفاده از سرم حاوی آنتی&shy; بادی بر ضد انگل کریپتوسپوریدیوم پارووم تایید شد و سپس با ستون کروماتوگرافی تخلیص گردید.</p> <p dir="RTL" style="text-align: justify;"><strong>نتایج:</strong> نتایج نشان داد که ژن <span dir="LTR">gp40/15</span> درپلاسمید <span dir="LTR">PET28a+</span> کلون شده است و نتایج <span dir="LTR">ColonyPCR</span> و هضم آنزیمی پلاسمید <span dir="LTR">PET28a+</span> حاوی ژن <span dir="LTR">gp40/15</span>، قطعه <span dir="LTR">921bp</span> را نشان داد. بیان <span dir="LTR">pEgp40/15</span> در باکتری اشرشیاکلی با استفاده از روش &shy;های <span dir="LTR">SDS-PAGE</span>، وسترن بلات والایزا تایید شد و باندی در حدود 43 کیلودالتون را نشان داد.</p> <p dir="RTL" style="text-align: justify;"><strong>نتیجه &shy;گیری: </strong>ژن <span dir="LTR">gp40/15</span> کلون شده در پلاسمید بیانی<span dir="LTR">PET28a+</span> به<span dir="LTR">&shy;</span>طور موفقیت آمیزی در باکتری اشرشیا کلی بیان شده و پروتئین نوترکیب <span dir="LTR">gp40/15</span> در آن تولید شده است. لذا، می &shy;توان از این پروتئین در مطالعات بعدی جهت ساخت واکسن &shy;های پروتئینی نوترکیب و طراحی کیت تشخیصی استفاده نمود.</p> <p style="text-align: justify;"><span style="font-family:times new roman;"><strong>Background:</strong> Cryptosporidium is <em>a parasitic protozoa</em> of medical and veterinary importance that causes gastroenteritis in a variety of vertebrate hosts. Some of the parasite surface antigens such as gp40/15 play an important role in attaching and invasion to host cell and stimulating the immune system. &nbsp;The possible access to recombinant proteins of the parasite can be provided by cloning and expression of these antigens. The aim of this study was to study the gene expression of gp40/15 Cryptosporidium parvum in <em>Escherichia coli (E. coli)<span dir="RTL">.</span></em></span></p> <p style="text-align: justify;"><span style="font-family:times new roman;"><strong>Materials and Methods:</strong> The sequence of gene gp40/15 for Cryptosporidium parvum was extracted from GenBank (No.AF155624) and was synthetically cloned in PET28a+. The recombinant plasmid was confirmed by the colony PCR and the BamHI and XhoI restriction enzymes. The recombinant plasmid was transferred into <em>E. coli</em> and the protein &nbsp;&nbsp;expression was verified using SDS-PAGE, Western blot and ELISA which was then purified by column chromatography.</span></p> <p style="text-align: justify;"><span style="font-family:times new roman;"><strong>Results:</strong> The results showed that the gene gp40/15 was cloned into PET28a+ plasmid. The confirmation of isolated gene cloned in PET28a+ was done by colony PCR, restriction enzymes which showed a 921bp band. The PET28a-gp40/15 plasmid expressed in <em>E. coli</em> showed a 43 kDa band which was confirmed using the SDS-PAGE, Western blotting and ELISA.</span></p> <p style="text-align: justify;"><span style="font-family:times new roman;"><strong>Conclusion:</strong> The results showed that the gene gp40/15 successfully cloned into the expression plasmid PET28a+ expressed in <em>E.coli</em> and recombinant protein gp40/15 is produced in it. Therefore, the recombinant protein can be used to design recombinant &nbsp;&nbsp;vaccines and diagnostic kits in further.</span></p> <p></p> کریپتوسپوریدیوم پارووم, ژن gp40/15, بیان پروتئین, اشرشیاکلی Cryptosporidium parvum, Gene gp40/15, Protein expression, Escherichia coli 73 80 http://feyz.kaums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-176-1252&slc_lang=fa&sid=1 Hosein Sobati حسین ثباتی sobatih@gmail.com 2900319475328460018361 2900319475328460018361 Yes Health Research Center, Baqiyatallah University of Medical Sciences مرکز تحقیقات بهداشت و تغذیه، دانشگاه علوم پزشکی بقیه اله (عج) Habaib Jasor -Gharebagh حبیب جسور قره باغ 2900319475328460018362 2900319475328460018362 No Department of Biological Sciences, Faculty of Basic Sciences, Imam Hussein University, Tehran, I. R. Iran. گروه علوم زیستی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین (ع) Hosein Honari حسین هنری 2900319475328460018363 2900319475328460018363 No Department of Biological Sciences, Faculty of Basic Sciences, Imam Hussein University, Tehran, I. R. Iran. گروه علوم زیستی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین(ع)