fa تخلیص هورمون hCG از ادرار زنان باردار و جداسازی زیرواحدهای آن medicine, paraclinic medicine, paraclinic پژوهشي Research <p><strong>سابقه و هدف:</strong> هورمون hCG از گلیکوپروتئین­های مهم دوران بارداری جهت حفظ جنین است که تقریبا 30 درصد وزن مولکولی این هورمون را قند تشکیل می­دهد. امروزه از این هورمون در درمان و هم­چنین ساخت واکسن­های ضد بارداری استفاده می‌شود. در تحقیق حاضر سعی در افرایش میزان خلوص و کوتاه کردن مسیر تخلیص این هورمون است. </p><p><strong>مواد و روش­ها:</strong> جهت تخلیص هورمون hCG از نمونه ادرار زنان باردار دو تا سه ماهه استفاده شد. نمونه جمع­آوری شده توسط بنزوات سدیم، اسید استیک و استون رسوب­دهی و تغلیظ گردید. با عبور نمونه‏ تغلیظ شده‏‏‏‏‎ از ستون کانکاناوالین A ( Con-A ) و جدا­کننده‌های دی­گلوکز و دی­مانوز ، hCG تخلیص گردید. با عبور نمونه hCG تخلیص شده از ستون DEAE-Sepharose 4B ، زیرواحدهای آلفا و بتا ی هورمون جداسازی گردید. خلوص نمونه‌ها به­وسیله SDS-PAGE و صحت آنها با روش الایزا و ایمونوبلاتینگ بررسی شد. </p><p><strong>نتایج:</strong> نمونه تغلیظ شده به­دست آمده از ادرار و نمونه hCG تخلیص شده از ستون کانکاناوالین A ، با استاندارد hCG از شرکت ارگانون از نظر وزن مولکولی و میزان خلوص ب ا روش SDS-PAGE و رنگ­آمیزی نیترات نقره مقایسه شدند . نمونه تغلیظ شده شبیه نمونه استاندارد و دارای تعدادی باند اضافی بود که باندهای اضافی بعد از تخلیص hCG حذف گردید. تایید هورمون hCG و زیرواحدهای آن با استفاده از آنتی بادی‌های مونوکلونال ضد زنجیره α و β به روش الایزا و وسترن بلات انجام گرفت. </p><p><strong>نتیجه­گیری:</strong> استفاده از قند دی­گلوکز قبل از دی­مانوز توانست باعث جداسازی hCG از سایر قطعات hCG و گلیکوپروتئین ­ ها شود. </p> <p><strong>Background:</strong> Human chorionic gonadotropin (hCG), containing 30% sugar by molecular weight, is an important glycoprotein in pregnancy to keep the fetus. Nowadays, hCG has been used as the basis for the contraceptive vaccines. This study aimed to increase the hormone purity and shorten its purification time. </p><p><strong>Materials and Methods:</strong> For hCG purification, urine samples of 2-3 month pregnant women were collected and precipitated using sodium benzoat, acetic acid and acetone. The concentrated hCG was run on Concanavalin A column (Con-A) and eluted using D-Glucose and D-Mannose. To isolate the purified  and  subunits of hCG, the Con-A column was run on DEAE-Sepharose 4B column. The purity of hCG and its subunits was confirmed by SDS-PAGE and validated by ELISA and Immunoblotting.</p><p><strong>Results:</strong> The concentrated urine sample and purified hCG sample were compared with the standard hCG control sample from Organon company, in terms of molecular weight and purity, using SDS-PAGE method and silver nitrate staining. Concentrated sample was identical to standard sample in number of additional bands, in which additional bands were removed after hCG purification. hCG hormone and its subunits were approved using the monoclonal antibodies against the α and β chains using ELISA and Western blot. </p><p><strong>Conclusion:</strong> According to the results of this study, hCG can be isolated from other parts of hCG and other glycoproteins using D-Glucose before D-Mannose. </p> کوریونیک گنادوتروپین انسانی، خالص سازی، کروماتوگرافی Human chorionic gonadotropin, Purification, Chromatography 71 79 http://feyz.kaums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-176-1029&slc_lang=fa&sid=1 Ali Moradi علی مرادی 290031947532846009876 290031947532846009876 No Manochehr Mirshahi منوچهر میرشاهی Mirshahi@modares.ac.ir 290031947532846009877 290031947532846009877 Yes Tarbiat Modares University دانشگاه تربیت مدرس