fa شناسایی و بیان ژنGRA7 توکسوپلاسما گونده‌ای سویه RH در پلاسمید یوکاریوت بیانی pcDNA3 medicine, paraclinic medicine, paraclinic پژوهشي Research <p><strong>سابقه و هدف:</strong> توکسوپلاسموزیس از بیماری‌های شایع جهان است و بیشتر به علت عوارض وخیمی که در موارد مادرزادی و بیماران مبتلا به ایدز ایجاد می کند، اهمیت دارد. یکی از راه های پیشگیری از این انگل در انسان و دام استفاده از واکسن می باشد. آنتی‌ژن ‌گرانولی 7 (GRA7) یک آنتی ژن فشرده ترشحی 29 کیلودالتونی توکسوپلاسما گونده ای می باشد که در واکوئل پارازیتوفروس تولید شده، توسط سلول های آلوده میزبان آزاد می شود و به عنوان کاندیدای تهیه واکسن مطرح می باشد.</p><p><strong>مواد و روش ها:</strong> در این مطالعه تجربی پلاسمید حاوی ژن GRA7 از باکتری TOPO استخراج شد. سپس این پلاسمید با آنزیم های BamH1 و EcoR1 برش داده شد. ژن جدا شده وارد پلاسمید pcDNA3 گردید. این کلونینگ با روش های PCR و تعیین توالی تایید شد. بیان پروتئین نیز با روش های SDS-PAGE و وسترن بلات تایید شد. <strong></strong></p><p><strong>نتایج:</strong> نتایج نشان داد که ژن GRA7 در پلاسمیدpcDNA3 کلون شده است و نتایج PCR پلاسمید pcDNA3 حاوی ژن GRA7 قطعه bp 733 را نشان داد. بیان pcGRA7 در سلول های CHO با استفاده از روش های SDS-PAGE و وسترن بلات باند 29 کیلودالتونی را نشان داد. </p><p><strong>نتیجه‌گیری:</strong> نتایج حاصل نشان داد که کلونینگ ژنGRA7 در پلاسمید pcDNA3 انجام شده و پلاسمید نوترکیب در سلول های یوکاریوتیک بیان گردیده است لذا، قابلیت آن را دارد که برای تحقیقات تهیه واکسن DNA استفاده شود. </p> <p><strong>Background: </strong>Toxoplasmosis, as a widespread and important disease, can cause severe complications in the congenital and HIV cases. Vaccination is one of the preventive approaches in humans and domestic animals. The <a href="file:///C:/pmid:9566518">GRA7, an excretory 29 </a><a href="file:///C:/pmid:9566518">kDa </a><a href="file:///C:/pmid:9566518"><i>Toxoplasma gondii </i>dense granule antigen released by the infected host cells </a>, has been considered as a candidate to produce a vaccine<a href="file:///C:/pmid:9566518"> <u>.</u> </a></p><p><strong>Materials and Methods:</strong> In this experimental study, the inserted plasmid containing GRA7 gene was extracted from TOP10 bacteria and digested with the BamH1 and EcoR1 enzymes. The isolated gene was inserted into the pcDNA3 plasmid . The cloning was confirmed by the PCR and sequencing. The protein expression was confirmed by the SDS-PAGE and Western blotting. </p><p><strong>Results: </strong>The results showed that the GRA7 gene was cloned into the pcDNA3 plasmid. The isolated gene cloned in pcDNA3 was confirmed by PCR and showed the 733bp band. The pcGRA7 plasmid expressed in the CHO cells showed the 29 kDa band using the SDS-PAGE and Western blotting. </p><p><strong>Conclusion: </strong>Considering that cloning of GRA7 gene has been done in the pcDNA3 plasmid and transformed in the eukaryotic cells, it can be used for the DNA vaccine researches. </p><p>  </p> سویه RHتوکسوپلاسما گونده‌ای، کلونینگ، ژنGRA7 ، پلاسمید یوکاریوتی pcDNA3 Toxoplasma gondii RH strain, Cloning, pc-GRA7, Eukaryotic pcDNA3 plasmid 8 13 http://feyz.kaums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-176-996&slc_lang=fa&sid=1 Hosein Vazini حسین وزینی 290031947532846009818 290031947532846009818 No Fatemeh Ghaffarifar فاطمه غفاری‌فر ghafarif@modares.ac.ir 290031947532846009819 290031947532846009819 Yes Tarbiat Modares University دانشگاه تربیت مدرس Zohreh Sharifi زهره شریفی 290031947532846009820 290031947532846009820 No Abdolhosein Dalimi-Asl عبدالحسین دلیمی‌اصل 290031947532846009821 290031947532846009821 No