fa کلونینگ و توالی یابی پلاسمید کد کننده پروتئین میکرونم 3 (MIC3) توکسوپلاسما گوندی عمومى General پژوهشي Research <p style="DIRECTION: rtl"> <strong>سابقه و هدف:</strong> توکسوپلاسما گوندی، انگل تک‌یاخته درون سلولی اجباری و عامل توکسوپلاسموزیس در انسان و حیوانات بوده که در سراسر جهان انتشار دارد. پروتئین میکرونم 3 (MIC3) با وزن ملکولی 90 کیلو دالتون، عامل چسبیدن انگل به سلولهای میزبان در آغاز تهاجم است و در تمام مراحل تکاملی از انگل ترشح شده و یک آنتی ژن قوی محسوب می شود؛ از این نظر علاوه بر ایمونوژن بودن و کاندید ساخت واکسن، در تشخیص نیز کاربرد دارد. هدف از این تحقیق، آماده سازی ژن MIC3 در پلاسمید ناقل جهت ساب‌کلونینگ در پلاسمیدهای یوکاریوت و پروکاریوت است. </p><p style="DIRECTION: rtl"><strong>مواد و روش ها:</strong> DNA ژنومی توکسوپلاسما، با روش فنل-کلروفرم استخراج شد. با استفاده از آغازگرهای اختصاصی ژن MIC3، ژن مورد نظر با روش PCR تکثیر شده و با استفاده از ژل آگارز، الکتروفورز گردید. محصول PCR، خالص شده و به‌کمک آنزیم T4DNA Ligase، به‌داخل یک وکتور کلونینگ کلون شد. در نهایت پلاسمید نوترکیب به‌داخل E.coli سوش TOP10 ترانسفورم گردید. با روش های PCR و برش آنزیمی و توالی یابی، کلون مورد نظرتائید شد.</p><p style="DIRECTION: rtl"><strong>نتایج:</strong> محصول PCR به‌صورت یک باند 1052 جفت باز در ژل آگارز 1 درصد مشاهده گردید. پلاسمیدهای نوترکیب تحت برش آنزیمی دو آنزیم محدود کننده HindIII و EcoRV قرار گرفت و دو باند 1052 و 2886 جفت باز به‌دست آمد که نشان داد قطعه MIC3 در پلاسمید pTZ57R/T کلون شده است.</p><p style="DIRECTION: rtl"><strong>نتیجه گیری:</strong> نتایج به‌دست آمده نشان داد، کلونینگ و ترانسفورم ژن MIC3 در پلاسمید pTZ57R/T با موفقیت انجام شده است.</p> <p><strong>Background:</strong> Toxoplasma gondii, an obligatory intracellular protozoan parasite, causing toxoplasmosis in human and animal with worldwide spread. Microneme 3 (MIC3) protein, a 90 kDa parasite factor attaching to the host cells in the beginning of the invasion, is secreted in all stages of parasite development (e.g. sporozoite, tachyzoite and bradyzoite) and also is considered as a potent antigen. Therefore, besides the immunogenicity and the candidacy for vaccine design, the protein is used for diagnostic purposes, as well. The aim of the present study was to transfer MIC3 gene into plasmid vector (PTZ57R/T) for subcloning in eukaryotic and prokaryotic plasmids. </p><p><strong>Materials and Methods:</strong> Toxoplasmia genomic DNA extracted using phenol-chloroform method and MIC3 gene was then amplified by PCR with specific primers. Electrophoresis was performed by using agarose gel and PCR product was purified by T4 DNA ligase enzyme into a cloning vector. Finally, recombinant plasmid was transformed into E.coli (Top10 strain). The extracted clone was verified with PCR, digestion enzymes and sequencing. </p><p><strong>Results:</strong> The PCR product was seen as a 1052bp band in agarose gel (1%). The recombinant plasmids was restricted by HindIII and EcoRV enzymes and two obtained 2886 and 1052bp bands showed that the MIC3 gene was cloned in PTZ57R/T plasmid. </p><p><strong>Conclusion:</strong> The results revealed that the cloning and transformation of MIC3 gene in pTZ57R/T was done successfully. </p> توکسوپلاسما گوندی، MIC3، کلونینگ، توالی یابی Toxoplasma gondii, MIC3, Cloning, Sequencing 200 206 http://feyz.kaums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-176-817&slc_lang=fa&sid=1 Mohamad Jafari-Modrek محمد جعفری مدرک 290031947532846006599 290031947532846006599 No Fatemeh Ghaffarifar فاطمه غفاری فر ghafarif@ modares.ac.ir 290031947532846006600 290031947532846006600 Yes Tarbiat Modares University of Medical Sciences دانشگاه تربیت مدرس Zohreh Sharifi زهره شریفی 290031947532846006601 290031947532846006601 No Abdolhosain Dalimi-Asl عبدالحسین دلیمی اصل 290031947532846006602 290031947532846006602 No