%0 Journal Article %A Jafari-Modrek, Mohamad %A Ghaffarifar, Fatemeh %A Sharifi, Zohreh %A Dalimi-Asl, Abdolhosain %T Cloning and sequencing the plasmid encoding Toxoplasma gondii Microneme 3 protein %J Feyz Medical Sciences Journal %V 15 %N 3 %U http://feyz.kaums.ac.ir/article-1-1239-fa.html %R %D 2011 %K Toxoplasma gondii, MIC3, Cloning, Sequencing, %X  سابقه و هدف: توکسوپلاسما گوندی، انگل تک‌یاخته درون سلولی اجباری و عامل توکسوپلاسموزیس در انسان و حیوانات بوده که در سراسر جهان انتشار دارد. پروتئین میکرونم 3 (MIC3) با وزن ملکولی 90 کیلو دالتون، عامل چسبیدن انگل به سلولهای میزبان در آغاز تهاجم است و در تمام مراحل تکاملی از انگل ترشح شده و یک آنتی ژن قوی محسوب می شود؛ از این نظر علاوه بر ایمونوژن بودن و کاندید ساخت واکسن، در تشخیص نیز کاربرد دارد. هدف از این تحقیق، آماده سازی ژن MIC3 در پلاسمید ناقل جهت ساب‌کلونینگ در پلاسمیدهای یوکاریوت و پروکاریوت است. مواد و روش ها: DNA ژنومی توکسوپلاسما، با روش فنل-کلروفرم استخراج شد. با استفاده از آغازگرهای اختصاصی ژن MIC3، ژن مورد نظر با روش PCR تکثیر شده و با استفاده از ژل آگارز، الکتروفورز گردید. محصول PCR، خالص شده و به‌کمک آنزیم T4DNA Ligase، به‌داخل یک وکتور کلونینگ کلون شد. در نهایت پلاسمید نوترکیب به‌داخل E.coli سوش TOP10 ترانسفورم گردید. با روش های PCR و برش آنزیمی و توالی یابی، کلون مورد نظرتائید شد.نتایج: محصول PCR به‌صورت یک باند 1052 جفت باز در ژل آگارز 1 درصد مشاهده گردید. پلاسمیدهای نوترکیب تحت برش آنزیمی دو آنزیم محدود کننده HindIII و EcoRV قرار گرفت و دو باند 1052 و 2886 جفت باز به‌دست آمد که نشان داد قطعه MIC3 در پلاسمید pTZ57R/T کلون شده است.نتیجه گیری: نتایج به‌دست آمده نشان داد، کلونینگ و ترانسفورم ژن MIC3 در پلاسمید pTZ57R/T با موفقیت انجام شده است. %> http://feyz.kaums.ac.ir/article-1-1239-fa.pdf %P 200-206 %& 200 %! %9 Research %L A-10-176-817 %+ Tarbiat Modares University of Medical Sciences %G eng %@ 1029-7855 %[ 2011