[صفحه اصلی ]   [Archive] [ English ]  
:: صفحه اصلي :: درباره نشريه :: آخرين شماره :: تمام شماره‌ها :: جستجو :: ثبت نام :: ارسال مقاله :: تماس با ما ::
:: دوره 21، شماره 4 - ( دوماه نامه 1396 ) ::
جلد 21 شماره 4 صفحات 359-366 برگشت به فهرست نسخه ها
کلون سازی و بررسی بیان ژن nlpD اسینتوباکتر بومانی در سلول های HDF انسان به روش RT-PCR
رسول هاشم زهی، عباس دوستی* ، محمد کارگر، مجتبی جعفری نیا
دانشیار گروه ژنتیک مولکولی، واحد مرودشت، دانشگاه آزاد اسلامی، مرودشت ، abbasdoosti@yahoo.com
چکیده:   (702 مشاهده)
سابقه و هدف: اسینتوباکتر بومانی یکی از باکتری­ های بسیار مقاوم در برابر انواع آنتی­ بیوتیک ­ها در جهان است. این باکتری عامل عفونت­ های بیمارستانی به صورت بومی یا همه­ گیر بوده و هنوز واکسن موثری علیه آن وجود ندارد. NlpD یکی از عوامل آنتی­ ژنی مهم است که سبب تحریک سیستم ایمنی میزبان می­ گردد. بنابراین، هدف از این تحقیق، کلون­سازی و بررسی بیان ژن nlpD باکتری اسینتوباکتر بومانی در سلول­ های HDF (Human dermal fibroblast) است.
مواد و روش­ ها: در این تحقیق تجربی ژن nlpD از روی ژنوم اسینتوباکتر بومانی با استفاده از روش PCR تکثیر شد. سپس، ژن مذکور به­ ترتیب در ناقل ­های pTZ57R/T و pIRES2-EGFP کلون­سازی و ساب­کلون گردید. تایید صحت کلون­ سازی ژن با سه روش PCR، آنزیم ­های برش دهنده و تعیین توالی مورد ارزیابی قرار گرفت. سپس، ناقل نوترکیب نهایی pIRES2-EGFP-nlpD با کمک الکتروپوریشن به سلول­ های HDF منتقل گردید و بیان ژن هدف در این سلول­ ها با روش RT-PCR بررسی شد.
نتایج: قطعه 831 جفت بازی مربوط به ژن nlpD اسینتوباکتر بومانی با موفقیت تکثیر شد. هم­ چنین، نتایج تحقیق نشان داد که سازواره نهایی pIRES2-EGFP-nlpD تشکیل گریده است. مشاهده باند 831 جفت بازی پس از انجام RT-PCR، در سلول­ های ترانسفورم شده نسبت به سلول­ های شاهد، موید بیان ژن nlpD در سلول­ هایHDF می­ باشد.
نتیجه ­گیری: سازواره نهایی ساخته شده در این تحقیق توان بیان ژن nlpD اسینتوباکتر بومانی را در سلول­ های یوکاریوتی دارد. بیان موفق ژن هدف می­ تواند در راستای بررسی ایمنی­ زایی در حیوانات آزمایشگاهی به­ عنوان یک واکسن نوترکیب مدنظر قرار گیرد. هم­ چنین، سازواره pIRES2-EGFP-nlpD از پتانسیل لازم برای بررسی به ­عنوان واکسن ژنی در تحقیقات آینده برخوردار است.
واژه‌های کلیدی: اسینتوباکتر بومانی، nlpD، بیان ژن، RT-PCR
متن کامل [PDF 317 kb]   (195 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشي | موضوع مقاله: عمومى
دریافت: ۱۳۹۶/۱/۷ | پذیرش: ۱۳۹۶/۴/۱۳ | انتشار: ۱۳۹۶/۷/۱۵
فهرست منابع
1. Pourhajibagher M, Hashemi FB, Pourakbari B, Aziemzadeh M, Bahador A. Antimicrobial resistance of Acinetobacter baumannii to imipenem in Iran: a systematic review and meta-analysis. Open Microbiol J 2016; 10: 32-42.
2. Howard A, O'Donoghue M, Feeney A, Sleator RD. Acinetobacter baumannii: an emerging opportunistic pathogen. Virulence 2012; 3(3): 243-50.
3. Kroger C, Kary SC, Schauer K, Cameron AD. Genetic regulation of virulence and antibiotic resistance in Acinetobacter baumannii. Genes (Basel) 2016; 8(1): pii: E12.
4. Ni Z, Chen Y, Ong E, He Y. Antibiotic resistance determinant-focused Acinetobacter baumannii vaccine designed using reverse vaccinology. Int J Mol Sci 2017; 18(2): pii: E458.
5. Ahmad TA, Tawfik DM, Sheweita SA, Haroun M, El-Sayed LH. Development of immunization trials against Acinetobacter baumannii. Trials Vaccinol 2016; 5: 53-60.
6. Hua X, Liu L, Fang Y, Shi Q, Li X, Chen Q, et al. Colistin resistance in Acinetobacter baumannii MDR-ZJ06 revealed by a multiomics approach. Front Cell Infect Microbiol 2017; 7: 45.
7. Singh R, Capalash N, Sharma P. Reverse vaccinology: developing vaccine against MDR Acinetobacter baumannii. J Vaccines Vaccin 2016; 7(3): 1-3.
8. Eslami E, Doosti A. Cloning and expression study of the hcpD gene of Helicobacter pylori. J Ardabil Uni Med Sci 2017; 17(1): 499-510. [in Persian]
9. Moriel DG, Beatson SA, Wurpel DJ, Lipman J, Nimmo GR, Paterson DL, et al. Identification of novel vaccine candidates against multidrug-resistant Acinetobacter baumannii. PLoS One 2013; 8(10): e77631.
10. Tidhar A, Flashner Y, Cohen S, Levi Y, Zauberman A, Gur D, et al. The NlpD lipoprotein is a novel Yersinia pestis virulence factor essential for the development of plague. PLoS One 2009; 4(9): e7023.
11. Doosti A, Ghasemi-Dehkordi P, Kargar M, Sharifi A. Generation of divalent DNA vaccine based on p39 and shiga-like toxin 2 (stx2) genes. Genetika 2015; 47(2): 499-507.
12. Ghorbani M, Doosti A. Isolation and cloning of Helicobacter Pylori ureE gene into pIRES2-DSRed expression vector to generate a gene vaccine. J Birjand Uni Med Sci 2016; 23(4): 286-97. [in Persian]
13. Snitkin ES, Zelazny AM, Montero CI, Stock F, Mijares L, Murray PR, et al. Genome-wide recombination drives diversification of epidemic strains of Acinetobacter baumannii. Proc Natl Acad Sci USA 2011; 108(33): 13758-63.
14. Taiwo AA, Falilat AJ, Ezemuel YS. Computational design of peptide vaccine against Acinetobacter baumannii infection using comparative genomic approach. Comput Biol Bioinform 2014; 2(1): 13-18.
15. Jorritsma SH, Gowans EJ, Grubor-Bauk B, Wijesundara DK. Delivery methods to increase cellular uptake and immunogenicity of DNA vaccines. Vaccine 2016; 34(46): 5488-94.
16. Luo G, Lin L, Ibrahim AS, Baquir B, Pantapalangkoor P, Bonomo RA, et al. Active and passive immunization protects against lethal, extreme drug resistant-Acinetobacter baumannii infection. PLoS One 2012; 7(1): e29446.
17. Lin L, Tan B, Pantapalangkoor P, Ho T, Hujer AM, Taracila MA, et al. Acinetobacter baumannii rOmpA vaccine dose alters immune polarization and immunodominant epitopes. Vaccine 2013; 31(2): 313-8.
18. Singh R, Garg N, Shukla G, Capalash N, Sharma P. Immunoprotective efficacy of Acinetobacter baumannii outer membrane protein, FilF, predicted In silico as a potential vaccine candidate. Front Microbiol 2016; 7: 158.
19. Huang W, Wang S, Yao Y, Xia Y, Yang X, Long Q, et al. OmpW is a potential target for eliciting protective immunity against Acinetobacter baumannii infections. Vaccine 2015; 33(36): 4479-85.
ارسال پیام به نویسنده مسئول

ارسال نظر درباره این مقاله
نام کاربری یا پست الکترونیک شما:

CAPTCHA code


XML   English Abstract   Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Hashemzehi R, Doosti A, Kargar M, Jaafarinia M. Gene cloning and evaluation of the Acinetobacter baumannii nlpD gene expression in human dermal fibroblast cells using RT-PCR. Feyz. 2017; 21 (4) :359-366
URL: http://feyz.kaums.ac.ir/article-1-3308-fa.html

هاشم زهی رسول، دوستی عباس، کارگر محمد، جعفری نیا مجتبی. کلون سازی و بررسی بیان ژن nlpD اسینتوباکتر بومانی در سلول های HDF انسان به روش RT-PCR. دوماه نامه علمي ـ پژوهشي فيض. 1396; 21 (4) :359-366

URL: http://feyz.kaums.ac.ir/article-1-3308-fa.html



دوره 21، شماره 4 - ( دوماه نامه 1396 ) برگشت به فهرست نسخه ها
مجله علمی پژوهشی فیض ::: دانشگاه علوم پزشکی کاشان KAUMS Journal ( FEYZ )
Persian site map - English site map - Created in 0.06 seconds with 31 queries by YEKTAWEB 3731