[صفحه اصلی ]   [Archive] [ English ]  
:: صفحه اصلي :: درباره نشريه :: آخرين شماره :: تمام شماره‌ها :: جستجو :: ثبت نام :: ارسال مقاله :: تماس با ما ::
:: دوره 20، شماره 5 - ( دوماه نامه 1395 ) ::
جلد 20 شماره 5 صفحات 447-453 برگشت به فهرست نسخه ها
طراحی، ترانسفورماسیون و تکثیر ایزوفرم نوترکیبVEGF111b در E. coli Top10 برای تولید داروی نوترکیب
مرتضی صادقی ، زهره حجتی
استادیار مرکز تحقیقات ژنتیک انسانی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله ، ms.sadeghi@yahoo.com
چکیده:   (1062 مشاهده)

سابقه و هدف: سنتز پروتئین­ های نوترکیب با خاصیت مهار گیرنده­ های رشد در تومورهای سرطانی یکی از راه­ های جدید درمان سرطان است. هدف مطالعه حاضر طراحی و کلون ایزوفرم نوترکیبVEGF111b  در وکتور pBudCE4.1 و بررسی سازگاری این سازه با  باکتری E. coli Top10  جهت تولید داروی نوترکیب است. 

مواد و روش ­ها: ایزوفرم جدید VEGF111b با استفاده از توالی­های موجود در بانک­های ژنی و نرم­افزار 7  oligoطراحی شده و توسط آنزیم­های BGLII و KpnI بریده شده و در پایین دست پروموتور EF-1 در وکتور pBudCE4.1 کلون شد. وکتور نوترکیب pBud.VEGF111b توسط روش کلرید کلسیم در باکتری E. coli Top10 ترانسفورم شد. جداسازی باکتری­ های نوترکیب در محیط LBA حاوی غلظت 3/0 و 5/0 درصد آنتی­بیوتیک زئوسین انجام شد. در مرحله آخر وکتور نوترکیب با استفاده از کیت استخراج DNA از ژل (Thermo K0513) استخراج شده و وجود  قطعه نوترکیب VEGF111b توسط هضم آنزیمی و تعیین توالی تائید شد.

نتایج: الحاق قطعه 111b در جایگاه مورد نظر تائید شد. تمامی کلونی­ های E. coli Top10 مشاهده شده در محیط حاوی غلظت 0/5 درصد زئوسین حاوی قطعه نوترکیب VEGF111b بودند و در غلظت 0/3 درصد زئوسین، 61/9 درصد کلونی نوترکیب مشاهده شد. وجود توالیVEGF111b  در باکتری ­های نوترکیب توسط هضم آنزیمی و تعیین توالی تائید شد.

نتیجه گیری: مطالعه حاضر گامی مهم در جهت تولید داروی نوترکیبVEGF111b  و بررسی عملکرد ضد سرطانی این پروتئین است. وکتورpBudCE4.1 با دارا بودن 2 جایگاه کلونینگ و 8 جایگاه برش آنزیمی کاندید مناسبی برای کلونینگ و بیان پروتئین­ های نوترکیب در E. coli Top10 است. 

واژه‌های کلیدی: E. coli، پروتئین نوترکیب، VEGF111b
متن کامل [PDF 581 kb]   (355 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشي | موضوع مقاله: medicine, paraclinic
دریافت: ۱۳۹۵/۸/۲۳ | پذیرش: ۱۳۹۵/۸/۲۳ | انتشار: ۱۳۹۵/۸/۲۳
فهرست منابع
1. Folkman J. Tumor angiogenesis. Adv Cancer Res 1985; 43: 175-203.
2. Gazdar AF, Minna JD. Angiogenesis and the multistage development of lung cancers. Clin Cancer Res 2000; 6(5): 1611-2.
3. Cardones AR, Banez LL. VEGF inhibitors in cancer therapy. Curr Pharm Des 2006; 12(3): 387-94.
4. Zondor SD, Medina PJ. Bevacizumab: an angiogenesis inhibitor with efficacy in colorectal and other malignancies. Ann Pharmacother 2004; 38(7-8): 1258-64.
5. Ferrara N, Davis-Smyth T. The biology of vascular endothelial growth factor. Endocr Rev 1997; 18(1): 4–25.
6. Brown LF, Detmar M, Claffey K, Nagy JA, Feng D, Dvorak AM, et al. Vascular permeability factor/vascular endothelial growth factor: a multifunctional angiogenic cytokine. EXS 1997; 79: 233–69.
7. Neufeld G, Cohen T, Gengrinovitch S, Poltorak Z. Vascular endothelial growth factor (VEGF) and its receptors. FASEB J 1999; 13(1): 9–22.
8. Bates DO, Cui TG, Doughty JM, Winkler M, Sugiono M, Shields JD, et al. VEGF165b, an inhibitory splice variant of vascular endothelial growth factor, is down-regulated in renal cell carcinoma. Cancer Res 2002; 62(14): 4123–31.
9. Woolard J, Wang WY, Bevan HS, Qiu Y, Morbidelli L, Pritchard-Jones RO, et al. VEG-F165b, an inhibitory vascular endothelial growth factor splice variant: mechanism of action, in vivo effect on angiogenesis and endogenous protein expression. Cancer Res 2004; 64(21): 7822–35.
10. Cui TG, Foster RR, Saleem M, Mathieson PW, Gillatt DA, Bates DO, et al. Differentiated human podocytes endogenously express an inhibitory isoform of vascular endothelial growth factor (VEGF165b) mRNA and protein. Am J Physiol Renal Physiol 2004; 286(4): 767–73.
11. Eyetech Study Group. Preclinical and phase 1A clinical evaluation of an anti-VEGF pegylated aptamer (EYE001) for the treatment of exudative age-related macular degeneration. Retina 2002; 22(2): 143–152.
12. Gragoudas ES, Adamis AP, Cunningham ET Jr, Feinsod M, Guyer DR. Pegaptanib for neovascular age-related macular degeneration. N Engl J Med 2004; 351(27): 2805–16.
13. Molinkova D. Purification of Escherichia coli-expressed HIS-tagged Maedi-Visna p25 core antigen by Ni2+-chelate affinity chromatography. Vet Med-Czech 2001; 46(2): 50-4.
14. Bitazar R, Taghi Naserpour F, Hajikhani B, Bagheri R, Salimi A. Cloning and expression of truncated chlamydi-al major outer membrane protein in E. coli: A miniature step forward. J Vaccines Vaccin 2014; 5: 1.
15. Sambrook J, Russell DW. Molecular Cloning: a Laboratory Manual. 4th ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press; 2001.
16. Ziche M, Donnini S, Morbidelli L. Development of new drugs in angiogenesis. Curr Drug Targets 2004; 5(5): 485-93.
17. Glade-Bender J, Kandel JJ, Yamashiro DJ. VEGF blocking therapy in the treatment of cancer. Expert Opin Biol Ther 2003; 3(2): 263-76.
18. Folkman J. Tumor angiogenesis: a possible control point in tumo growth. Ann Intern Med 1975; 82(1): 96-100.
19. Jain RK. Tumor angiogenesis and accessibility: role of vascular endothelial growth factor. Semin Oncol 2002; 29 (6 Suppl 16): 3-9.
20. Norouzi R, Hojati Z. Construction of pBud.CE4.1 IFNβ (Human Beta Interferon) and Analysis of its Expression Level in Transfected HEK293 Cell via This Construct. J Isfahan Med Sch 2015; 33(354): 1691-700.
21. Yazdanpanah-Samani M, Mahmoudi Maymand E, Jahangeerfam T, Ghaderi A. Construction of CTLA-4-Ig Fusion Gene in pBudCE4.1 Expression Vector. Avicenna J Med Biotechnol 2015; 7(4): 179–81.
22. Jia X, Cheng K, Mahato RI. Coexpression of Vascular Endothelial Growth Factor and Interleukin-1 Receptor Antagonist for Improved Human Islet Survival and Function. Mol Pharm 2007; 4(2): 199–207.
23. Yazdanfar M, Bandehpour M, Yarian F, Koochaki A, Parivar K, Kazemi B. Cloning and expression of human vascular endothelial growth factor gene and inhibition of its expression by antisense in prokaryotic system. Daru 2010; 18(4): 281–5.
24. Leopold AV, Baklaushev VP, Pavlov KA, Chekhonin VP. Expression of a Recombinant Extracellular Fragment of Human Vascular Endothelial Growth Factor Receptor VEGFR1 in E. coli. Experi Biol Med 2011; 151(3): 322–7.
25. Kazemi-Lomedasht F, Behdani M, Pooshang Bagheri K, Habibi Anbouhi M, Abolhassani M, Khanahmad H, et al. Expression and Purification of Functional Human Vascular Endothelial Growth Factor-A121; the Most Important Angiogenesis Factor. Adv Pharm Bull 2014; 4(4): 323-8.
26. Ausubel FM, Brent R, Kingston RE, Moore DD, Seidman JG, Smith JA, et al. Current Protocols in Molecular Biology. John Wiley & Sons, New York; 1993.
27. Van Blokland HJ, Kwaks TH, Sewalt RG, Verhees JA, Klaren VN, Siersma TK, et al. A novel, high stringency selection system allows screening of few clones for high protein expression. J Biotechnol 2007; 128(2): 237-45.
ارسال پیام به نویسنده مسئول

ارسال نظر درباره این مقاله
نام کاربری یا پست الکترونیک شما:

کد امنیتی را در کادر بنویسید >


XML   English Abstract   Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Sadegi M, Hojjati Z. Design, transformation and proliferation of VEGF111b recombinant isoform in Escherichia coli Top10 in order to produce recombinant drugs. Feyz. 2016; 20 (5) :447-453
URL: http://feyz.kaums.ac.ir/article-1-3179-fa.html

صادقی مرتضی، حجتی زهره. طراحی، ترانسفورماسیون و تکثیر ایزوفرم نوترکیبVEGF111b در E. coli Top10 برای تولید داروی نوترکیب. دوماه نامه علمي ـ پژوهشي فيض. 1395; 20 (5) :447-453

URL: http://feyz.kaums.ac.ir/article-1-3179-fa.html



دوره 20، شماره 5 - ( دوماه نامه 1395 ) برگشت به فهرست نسخه ها
مجله علمی پژوهشی فیض ::: دانشگاه علوم پزشکی کاشان KAUMS Journal ( FEYZ )
Persian site map - English site map - Created in 0.05 seconds with 31 queries by YEKTAWEB 3658