تخلیص هورمون hCG از ادرار زنان باردار و جداسازی زیرواحدهای آن
|
علی مرادی ، منوچهر میرشاهی*  |
دانشگاه تربیت مدرس ، Mirshahi@modares.ac.ir |
|
چکیده: (7666 مشاهده) |
سابقه و هدف: هورمون hCG از گلیکوپروتئینهای مهم دوران بارداری جهت حفظ جنین است که تقریبا 30 درصد وزن مولکولی این هورمون را قند تشکیل میدهد. امروزه از این هورمون در درمان و همچنین ساخت واکسنهای ضد بارداری استفاده میشود. در تحقیق حاضر سعی در افرایش میزان خلوص و کوتاه کردن مسیر تخلیص این هورمون است. مواد و روشها: جهت تخلیص هورمون hCG از نمونه ادرار زنان باردار دو تا سه ماهه استفاده شد. نمونه جمعآوری شده توسط بنزوات سدیم، اسید استیک و استون رسوبدهی و تغلیظ گردید. با عبور نمونه تغلیظ شده از ستون کانکاناوالین A ( Con-A ) و جداکنندههای دیگلوکز و دیمانوز ، hCG تخلیص گردید. با عبور نمونه hCG تخلیص شده از ستون DEAE-Sepharose 4B ، زیرواحدهای آلفا و بتا ی هورمون جداسازی گردید. خلوص نمونهها بهوسیله SDS-PAGE و صحت آنها با روش الایزا و ایمونوبلاتینگ بررسی شد. نتایج: نمونه تغلیظ شده بهدست آمده از ادرار و نمونه hCG تخلیص شده از ستون کانکاناوالین A ، با استاندارد hCG از شرکت ارگانون از نظر وزن مولکولی و میزان خلوص ب ا روش SDS-PAGE و رنگآمیزی نیترات نقره مقایسه شدند . نمونه تغلیظ شده شبیه نمونه استاندارد و دارای تعدادی باند اضافی بود که باندهای اضافی بعد از تخلیص hCG حذف گردید. تایید هورمون hCG و زیرواحدهای آن با استفاده از آنتی بادیهای مونوکلونال ضد زنجیره α و β به روش الایزا و وسترن بلات انجام گرفت. نتیجهگیری: استفاده از قند دیگلوکز قبل از دیمانوز توانست باعث جداسازی hCG از سایر قطعات hCG و گلیکوپروتئین ها شود. |
|
واژههای کلیدی: کوریونیک گنادوتروپین انسانی، خالص سازی، کروماتوگرافی |
|
متن کامل [PDF 535 kb]
(3922 دریافت)
|
نوع مطالعه: پژوهشي |
موضوع مقاله:
medicine, paraclinic دریافت: 1391/12/21 | ویرایش نهایی: 1391/12/26 | پذیرش: 1391/12/26 | انتشار: 1391/12/26
|
|
|
|