Feyz Medical Sciences Journal

fa بررسی اثر عصاره جفت انسانی بر تمایز استخوانی سلول های بنیادی مزانشیمی مشتق از بندناف انسان Effect of Human Placental Extract on Osteogenic Differentiation of Human Umbilical Cord-Derived Mesenchymal Stem Cells medicine, paraclinic medicine, paraclinic پژوهشي Research زمینه و هدف : سلول های بنیادی مزانشیمی با خاصیت خودنوسازی و تمایز به بافت های دیگر نقش کلیدی در پزشکی بازساختی ایفا می کند و عصاره جفت انسانی سرشار از فاکتور های رشد و اسیدآمینه ها و دیگر مواد مهم هستند . مطالعه حاضر با هدف بررسی اثر عصاره جفت بر تمایز استخوانی سلول های بنیادی مزانشیمی  جهت دستیابی به یک روش درمانی در جهت ترمیم مشکلات استخوانی طراحی و اجرا شد. روش ها :سلول های بنیادی مزانشیمی پس از استخراج  از بند ناف و کشت ، با استفاده از عصاره جفت به سمت سلول های استخوانی تمایز داده شدند. جهت سنجش عدم سمیت و زنده مانی سلول ها از روش MTT استفاده شد. میزان پروتین عصاره جفت از روش بردفورد اندازه گیری شد. عصاره جفت از لحاظ آلودگی مایکوپلاسما به روش PCR ، آلودگی باکتری از روش Pour plate ، آلودگی اندوتوکسین از روش LAL و آلودگی فلزات سنگین از روش استفاده از پلاسما در دستگاه ICP  مورد سنجش قرار گرفت. برای تشخیص مقدار هموگلوبین عصاره جفت نیز از روش درابکین استفاده شد. برای تایید تمایز و سنجش تراکم کلسیم (استخوانی شدن)از رنگ آمیزی الیزارین رد و برای ارزیابی میزان بیان ژن آلکالین فسفاتاز و ژن استئوکلسین از روش (<a name="_Hlk226545601">Real time PCR</a>) استفاده شد.. تمام آزمایش ها در سه تکرار مستقل انجام شد داده ها به صورت منفی و مثبت انحراف معیار گزارش شدند وتجزیه و تحلیل آماری با استفاده از ANOVA انجام شد.و داده های Real time PCR نیز با نرم افزار های LinRegPCR و REST-RGXLتحلیل شدند و مقادیر P< 0.05از نظر آماری معنی دار در نظر گرفته شد. یافته ها : با انجام تست MTT مشخص شد که عصاره جفت نه تنها سمیت نداشته بلکه در مواجه با سلول های بنیادی باعث پیشرفت سریع تر و بهتر در عملکرد استخوانی شدن سلول ها شده است .همچنین با توجه به سطح معناداری و کشت ۱۴ روزه میزان <a name="_Hlk226546067">ALP</a> و رسوبات کلسیمی با اثر عصاره جفت به تدریج بیشتر شد. ژن <a name="_Hlk226546021">استئوکلسین</a> نیز در بالاترین رقت به مقدار ۱میلی لیتر عصاره جفت تفاوت معناداری نسبت به گروه کنترل نشان داد که ( <a name="_Hlk231095425">P< 0.05</a>(بوده و احتمال ۹۵ درصد انجام شده است. نتایج سنجش عصاره از لحاظ الودگی مایکوپلاسما ، اندوتوکسین، باکتری و فلزات سنگین نشان داد عصاره عاری از الودگی هاست و مقدار نهایی هموگلوبین نیز گویای درستی هموگلوبین زدایی از عصاره جفت می باشد. نتیجه گیری : طبق یافته های به دست آمده از نمودارتست MTT و نمودار های Real time PCR مشخص شد که اثر عصاره جفت بر سلول های بنیادی در مسیر تمایز به سمت استخوانی شدن ،اثر تسریع کننده روند را داشته و با توجه به تفاوت های معناداری (P< 0.05) در رقت های مختلف از عصاره  و با بیشتر شدن رقت ها و درنهایت بالاترین رقت مورد استفاده از عصاره جفت و در نمودار ژن استئوکلسین، ALP و کلسیم تفاوت معناداری (P< 0.05)با گروه کنترل را نشان داد که با احتمال بسیار بالایی اثرگزاری انجام شده است . از نتایج به دست آمده می توان گفت که احتمالا غنی بودن عصاره جفت از لحاظ داشتن فاکتور های رشد ، ویتامین ها و مواد معدنی باعث سرعت بخشیدن به روند تمایز سلول های بنیادی مزانشیمی به سمت سلول های استخوانی شده است.   Background and Aim: Mesenchymal stem cells possess self-renewal capacity and the ability to differentiate into various cell lineages. Human placenta extract is rich in growth factors and amino acids and has been widely considered in regenerative medicine. This study aimed to investigate the effect of human placenta extract on the osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells. Methods: In this experimental study, the cytotoxicity and proliferative effects of human placenta extract on mesenchymal stem cells were evaluated using the MTT assay. Osteogenic differentiation was assessed through biochemical and molecular analyses, including alkaline phosphatase (ALP) activity, calcium deposition, and gene expression analysis using real-time PCR.. All experiments were performed in triplicate. Data were expressed as mean ± standard deviation (SD) and analyzed using one-way ANOVA. Real-time PCR data were analyzed using LinRegPCR and REST-RGXL software. A P value <0.05 was considered statistically significant. Results: The MTT assay results indicated that placenta extract was non-toxic and even enhanced cell viability and proliferation. Furthermore, osteogenic differentiation was significantly improved. After 14 days of culture, ALP activity and calcium deposition increased progressively in treated groups compared to the control group. Osteocalcin expression also increased at higher concentrations of placenta extract, with statistically significant differences (P < 0.05). Conclusion: Based on the findings, human placenta extract enhances and accelerates the osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells. The observed increases in ALP activity, calcium deposition, and osteocalcin expression indicate its potential role in bone tissue engineering applications.   کلیدواژه ها : عصاره جفت, سلول های بنیادی مزانشیمی, تمایز, بند ناف, استخوان Placenta extract, Mesenchymal stem cells, Differentiation, Umbilical cord, Bone 0 0 http://feyz.kaums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-5146-1&slc_lang=fa&sid=1 Fateme Parvinifar فاطمه پروینی فر fparvini4550@gmail.com 2900319475328460053226 0009-0003-1362-4576 No Hanieh Jafary هانیه جعفری h-jafary@iau.ac.ir 2900319475328460053227 2900319475328460053227 Yes Ehsan Seyed jafari احسان سیدجعفری seyedjafari@ut.ac.ir 2900319475328460053228 2900319475328460053228 No